TOV-21G細(xì)胞 神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞（神經(jīng)元）不易培養(yǎng)，只有在適宜情況下，如接種在膠原底層上，或加入神經(jīng)生長因子和膠質(zhì)細(xì)胞因子時(shí)，可出現(xiàn)一定程度的分化，長出突起等現(xiàn)象，但很難使之增值。而神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)...

 神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)

神經(jīng)細(xì)胞（神經(jīng)元）不易培養(yǎng)，只有在適宜情況下，如接種在膠原底層上，或加入神經(jīng)生長因子和膠質(zhì)細(xì)胞因子時(shí)，可出現(xiàn)一定程度的分化，長出突起等現(xiàn)象，但很難使之增值。而神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)組織中比較容易培養(yǎng)的成分。

人、鼠等腦組織即可用于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)，不僅能獲得生長的膠質(zhì)細(xì)胞，也可形成能傳代的二倍體細(xì)胞系。一般說來，膠質(zhì)細(xì)胞在培養(yǎng)中生長不穩(wěn)定，不易自發(fā)轉(zhuǎn)化，但對外界因素仍保持很好的敏感性，可用ROUS病毒和SV4等誘發(fā)轉(zhuǎn)化。

一、設(shè)備： 無菌操作設(shè)備。

二、大型設(shè)備CO₂ 培養(yǎng)箱：恒溫5%、10%CO₂維持培養(yǎng)液中pH值。

倒置顯微鏡：用于每天觀察貼壁細(xì)胞生長情況。

解剖顯微鏡，用于準(zhǔn)確地取材。未分化癌細(xì)胞，BHT-101細(xì)胞

常溫冰箱：-4℃，用于保存各種培養(yǎng)液，解剖液和鼠尾膠。

低溫冰箱：-20℃--80℃，用于儲存血清酶，貴重物品和試劑。

電熱干烤箱：用于消毒玻璃器皿。

高壓消毒鍋：用于消毒培養(yǎng)皿，手術(shù)器械。

過濾器：配制解剖液、培養(yǎng)液，必須過濾后才可使用，以去除細(xì)菌。

滲透壓儀，pH劑，天平等。

三、培養(yǎng)器皿及手術(shù)器械

1、培養(yǎng)皿：常用35mm塑料及玻璃皿，解剖取材用15mm-90mm直徑。

2、培養(yǎng)板，24-40孔，可用于開放培養(yǎng)。

3、培養(yǎng)瓶：

4、吸管，常用1，5，10ml，均需泡酸、洗滌、滅菌后方可使用。

5、各類培養(yǎng)液貯存器。

6、小型手術(shù)器械。

準(zhǔn)備：

一、配制培養(yǎng)液

（1）解剖液：以無機(jī)鹽（去除Ca²⁺ , Mg²⁺）加葡萄糖配制成PBS緩沖液，保持一定的滲透壓和pH值。

（2）基礎(chǔ)培養(yǎng)基（MEM）：主要為多種氨基酸，加入葡萄糖，雙蒸餾水溶解。

（3）接種培養(yǎng)液：用于胰酶消化后的細(xì)胞分散，做成細(xì)胞懸液，其成分為MEM含1%谷氨酰胺，另加入10%馬血清，當(dāng)天配制。

（4）維持培養(yǎng)液：接種后24h，全部換成此液，后每2周換一次，每次換1/2。其成分為MEM中含5%馬血清，1%谷氨酰胺，及適量的支持性營養(yǎng)物質(zhì)。

二、培養(yǎng)基質(zhì) 常用鼠尾膠、小牛皮膠，多聚賴氨酸，再涂膠

三、消毒培養(yǎng)皿的備用。所有培養(yǎng)器皿均需清水沖洗2-3d，達(dá)兩次ddH₂O，每遍洗刷3-4次，加塞包裝，置于烤箱中干燥消毒，于培養(yǎng)前1天進(jìn)行。

神經(jīng)細(xì)胞分散培養(yǎng)

（一）選材 常用胚胎動(dòng)物或新生鼠神經(jīng)組織。雞胚常用胚齡6-8d，新生鼠或胎鼠（12-14d）或人胚胎。不過也有認(rèn)為與組織相關(guān)。如大白鼠胚胎以19d為宜，小鼠以18d為宜，大鼠紋狀體以10d為宜；若紋狀體與黑質(zhì)聯(lián)合培養(yǎng)的大鼠胚，則黑質(zhì)以13d，紋狀體18-21d為宜；小腦以20-21d小鼠胚胎，所獲蒲氏細(xì)胞成活率高，顆粒細(xì)胞正在分化；脊髓與DRG聯(lián)合培養(yǎng)，常用4-7d雞胚或12-14d小鼠胚胎，取材易，神經(jīng)成活率高。

（二）取材。腦則取出相應(yīng)組織，在解剖液中先剪碎，以使胰酶消化。脊髓則固定于瓊脂板上，用小刀將其要成背腹兩側(cè)，分別培養(yǎng)。

（三）細(xì)胞分離與接種。神經(jīng)組織用0.125-0.25%胰蛋白酶在37℃孵育30min，移入接種液，停止消化，并洗去胰蛋白酶液，用細(xì)口吸管吹打細(xì)胞懸液，使其充分分散，如此多次，待沉淀后吸出上層細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)，預(yù)置細(xì)胞密度，接種于培養(yǎng)皿（1×10⁶），做電生理應(yīng)為5×10⁵或更低。TOV-21G細(xì)胞

素爾細(xì)胞庫提供遺傳變異細(xì)胞系、正常組織來源細(xì)胞系、腫瘤細(xì)胞系、工程細(xì)胞系、干細(xì)胞系，涉及人類，大鼠、小鼠、鳥類、倉鼠、魚類、貓類、狗、牛、貂、豬、恒河猴、長鼻袋鼠等。

TOV-21G細(xì)胞

SUER1073(XR)  DU 145細(xì)胞

SUER1074(XR)  DU4475細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞

SUER1075(XR)  DV-90細(xì)胞腺癌；惡性腺瘤細(xì)胞

SUER1076(XR)  EB1細(xì)胞伯基特淋巴瘤細(xì)胞

SUER1077(XR)  EB2細(xì)胞伯基特淋巴瘤細(xì)胞

SUER1078(XR)  EBC-1細(xì)胞鱗狀細(xì)胞癌扁平上皮癌細(xì)胞

SUER1079(XR)  ECC10細(xì)胞小細(xì)胞腺癌細(xì)胞

SUER1080(XR)  ECC12細(xì)胞小細(xì)胞腺癌細(xì)胞

SUER1081(XR)  EC-GI-10細(xì)胞

SUER1082(XR)  EFE-184細(xì)胞

SUER1083(XR)  EFM-19細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞

SUER1084(XR)  EFM-192A細(xì)胞

SUER1085(XR)  EFO-21細(xì)胞漿液性癌細(xì)胞

SUER1086(XR)  EFO-27細(xì)胞粘液癌膠樣癌細(xì)胞

SUER1087(XR)  EHEB細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病-小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤細(xì)胞

SUER1088(XR)  EJM細(xì)胞漿細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞

SUER1089(XR)  EM-2細(xì)胞慢性髓樣白血病爆炸階段細(xì)胞

SUER1090(XR)  EN細(xì)胞

SUER1091(XR)  EOL-1細(xì)胞急性髓性白血病細(xì)胞

SUER1092(XR)  EPLC-272H細(xì)胞鱗狀細(xì)胞癌扁平上皮癌細(xì)胞

SUER1093(XR)  ES-2細(xì)胞透明細(xì)胞癌清晰細(xì)胞癌亮細(xì)胞癌細(xì)胞

SUER1094(XR)  ESS-1細(xì)胞中層混合腫瘤細(xì)胞

SUER1095(XR)  EVSA-T細(xì)胞

SUER1096(XR)  EW8細(xì)胞

SUER1097(XR)  EWS502細(xì)胞

SUER1098(XR)  F-36P細(xì)胞急性髓性白血病細(xì)胞

SUER1099(XR)  F5細(xì)胞

SUER1100(XR)  FaDu細(xì)胞 鱗狀細(xì)胞癌扁平上皮癌細(xì)胞

SUER1101(XR)  FTC-133細(xì)胞濾泡性癌細(xì)胞

SUER1102(XR)  FTC-238細(xì)胞濾泡性癌細(xì)胞

SUER1103(XR)  FU97細(xì)胞彌漫性腺癌細(xì)胞

SUER1104(XR)  FU-OV-1細(xì)胞漿液性癌細(xì)胞

SUER1105(XR)  G-292, clone A141B1細(xì)胞

SUER1106(XR)  G-361細(xì)胞

SUER1107(XR)  G-401細(xì)胞

SUER1108(XR)  G-402細(xì)胞

SUER1109(XR)  GA-10細(xì)胞伯基特淋巴瘤細(xì)胞

SUER1110(XR)  GAMG細(xì)胞

SUER1111(XR)  GB-1細(xì)胞星形細(xì)胞瘤分級IV細(xì)胞

SUER1112(XR)  GCIY細(xì)胞腺癌；惡性腺瘤細(xì)胞

SUER1113(XR)  GCT細(xì)胞

SUER1114(XR)  GDM-1細(xì)胞急性髓性白血病細(xì)胞

SUER1115(XR)  GI-1細(xì)胞神經(jīng)膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞

SUER1116(XR)  GMS-10細(xì)胞星形細(xì)胞瘤分級IV細(xì)胞

SUER1117(XR)  GOS-3細(xì)胞神經(jīng)膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞

SUER1118(XR)  GP2d細(xì)胞腺癌細(xì)胞

SUER1119(XR)  GRANTA-519細(xì)胞套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞

SUER1120(XR)  GR-M細(xì)胞

SUER1121(XR)  GSS細(xì)胞腺癌；惡性腺瘤細(xì)胞

SUER1122(XR)  GSU細(xì)胞腺癌；惡性腺瘤細(xì)胞

SUER1123(XR)  H4細(xì)胞

SUER1124(XR)  HARA細(xì)胞鱗狀細(xì)胞癌扁平上皮癌細(xì)胞

SUER1125(XR)  HCC1143細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞

SUER1126(XR)  HCC-1171細(xì)胞非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

SUER1127(XR)  HCC1187細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞

SUER1128(XR)  HCC-1195細(xì)胞混合腺鱗狀癌細(xì)胞

SUER1129(XR)  HCC-1359細(xì)胞大細(xì)胞癌細(xì)胞

SUER1130(XR)  HCC1395細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞

SUER1131(XR)  HCC1419細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞

SUER1132(XR)  HCC1428細(xì)胞

SUER1133(XR)  HCC-1438細(xì)胞大細(xì)胞癌細(xì)胞

SUER1134(XR)  HCC-15細(xì)胞鱗狀細(xì)胞癌扁平上皮癌細(xì)胞

SUER1135(XR)  HCC1500細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞

SUER1136(XR)  HCC1569細(xì)胞化生性癌細(xì)胞

SUER1137(XR)  HCC-1588細(xì)胞鱗狀細(xì)胞癌扁平上皮癌細(xì)胞

SUER1138(XR)  HCC1599細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞

SUER1139(XR)  HCC1806細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞

SUER1140(XR)  HCC-1833細(xì)胞腺癌；惡性腺瘤細(xì)胞

SUER1141(XR)  HCC-1897細(xì)胞鱗狀細(xì)胞癌扁平上皮癌細(xì)胞

SUER1142(XR)  HCC1937細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞

SUER1143(XR)  HCC1954細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞

SUER1144(XR)  HCC202細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞

SUER1145(XR)  HCC-2108細(xì)胞腺癌；惡性腺瘤

SUER1146(XR)  HCC2157細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞

SUER1147(XR)  HCC2218細(xì)胞導(dǎo)管癌細(xì)胞

SUER1148(XR)  HCC-2279細(xì)胞腺癌；惡性腺瘤細(xì)胞

SUER1149(XR)  HCC-2814細(xì)胞鱗狀細(xì)胞癌扁平上皮癌細(xì)胞

SUER1150(XR)  HCC2935細(xì)胞非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

SUER1151(XR)  HCC-33細(xì)胞小細(xì)胞癌細(xì)胞

SUER1152(XR)  HCC364細(xì)胞腺癌；惡性腺瘤

SUER1153(XR)  HCC-366細(xì)胞

SUER1154(XR)  HCC38細(xì)胞

SUER1155(XR)  HCC4006細(xì)胞

SUER1156(XR)  HCC-44細(xì)胞

SUER1157(XR)  HCC-56細(xì)胞

SUER1158(XR)  HCC70細(xì)胞

SUER1159(XR)  HCC-78細(xì)胞

SUER1160(XR)  HCC827細(xì)胞

SUER1161(XR)  HCC-827-GR5細(xì)胞

SUER1162(XR)  HCC-95細(xì)胞

SUER1163(XR)  HCT 116細(xì)胞

SUER1164(XR)  HCT-15細(xì)胞

SUER1165(XR)  HCT-8細(xì)胞

SUER1166(XR)  HDLM-2細(xì)胞

SUER1167(XR)  HD-MY-Z細(xì)胞

SUER1168(XR)  HDQ-P1細(xì)胞

SUER1169(XR)  HEC-108細(xì)胞

SUER1170(XR)  HEC-151細(xì)胞

SUER1171(XR)  HEC-1-A細(xì)胞

SUER1172(XR)  HEC-1-B細(xì)胞

SUER1173(XR)  HEC-251細(xì)胞

SUER1174(XR)  HEC-265細(xì)胞

SUER1175(XR)  HEC-50B細(xì)胞

SUER1176(XR)  HEC-59細(xì)胞

SUER1177(XR)  HEC-6細(xì)胞

SUER1178(XR)  HEK TE細(xì)胞

SUER1179(XR)  HEL細(xì)胞

SUER1180(XR)  HEL 92.1.7細(xì)胞

SUER1181(XR)  Hep 3B2.1-7細(xì)胞

SUER1182(XR)  Hep G2細(xì)胞

SUER1183(XR)  Hey-A8細(xì)胞

SUER1184(XR)  HGC-27細(xì)胞

SUER1185(XR)  HH細(xì)胞

SUER1186(XR)  HK-2細(xì)胞

SUER1187(XR)  HL-60細(xì)胞

SUER1188(XR)  HLC-1細(xì)胞

SUER1189(XR)  HLE細(xì)胞

SUER1190(XR)  HLF細(xì)胞

SUER1191(XR)  HLF-a細(xì)胞

SUER1192(XR)  HMC-1-8細(xì)胞

SUER1193(XR)  HMCB細(xì)胞

SUER1194(XR)  HMEL細(xì)胞

SUER1195(XR)  HOS細(xì)胞

SUER1196(XR)  HPAC細(xì)胞

SUER1197(XR)  HPAF-II細(xì)胞

SUER1198(XR)  HPB-ALL細(xì)胞

SUER1199(XR)  Hs 172.T細(xì)胞

SUER1200(XR)  Hs 229.T細(xì)胞

SUER1201(XR)  Hs 255.T細(xì)胞

SUER1202(XR)  Hs 274.T細(xì)胞

SUER1203(XR)  Hs 281.T細(xì)胞

SUER1204(XR)  Hs 294T細(xì)胞

SUER1205(XR)  Hs 343.T細(xì)胞

SUER1206(XR)  Hs 571.T細(xì)胞

TOV-21G細(xì)胞

（四）抑制膠質(zhì)細(xì)胞生長。培養(yǎng)3-5d后，也有人認(rèn)為培養(yǎng)7d后，用阿糖胞苷，或5-FU抑制神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的生長。

（五）觀察。接種6-12h，開始貼壁，并有集合現(xiàn)象，細(xì)胞生長突起明顯，5-7d膠質(zhì)細(xì)胞增生明顯，7-10d膠質(zhì)細(xì)胞成片于神經(jīng)細(xì)胞下面，形成地毯，2周時(shí)神經(jīng)細(xì)胞生長豐滿，四周暈光明顯，一個(gè)月后，有些神經(jīng)細(xì)胞開始退化，變形，甚至出現(xiàn)空泡，一般培養(yǎng)2-4周宜。

但神經(jīng)細(xì)胞只能增大，而不能增殖，只能原代，不能傳代，不會有細(xì)胞周期，而且隨培養(yǎng)時(shí)間的延長，細(xì)胞數(shù)量在下降，但膠質(zhì)細(xì)胞可以，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞也可以。在培養(yǎng)過程中，早期9-12d時(shí)，有較多的神經(jīng)細(xì)胞死亡，這是一次死亡階段，應(yīng)注意保持條件的恒定。在此之后存活下去的細(xì)胞一般突起長而多，且相互形成突觸。

（六）常用培養(yǎng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)有：FCM的蛋白總量分析；膜片鉗與離子通道的分析；免疫組化分析；

但免疫組化分析應(yīng)注意，由于抗體直接作用于活細(xì)胞，不易穿透活細(xì)胞，故對核內(nèi)抗原定位時(shí)，先考慮膜對抗體的通透性問題。常用化學(xué)試劑以增加其通透性或采用冰凍方法解決。

在免疫組化中，或其它組織學(xué)染色中，常用不同的染色方法以區(qū)分不同細(xì)胞，如半乳糖腦苷脂對小樹突膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記明顯；GFAP對星形膠質(zhì)細(xì)胞具有特異性染色等。這對研究神經(jīng)系統(tǒng)中膠質(zhì)細(xì)胞功能具有大的應(yīng)用價(jià)值。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞以往多被忽視，其在腦血管疾病（如缺血性損傷）、退行性疾病（如AD、PD）、損傷后膠質(zhì)細(xì)胞的填充等具有不可忽視的作用。它也是神經(jīng)細(xì)胞功能和營養(yǎng)支持的物質(zhì)基礎(chǔ)。

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