HCP檢測試劑盒,解決宿主細胞蛋白殘留檢測難題
發布時間：2019-10-18瀏覽次數：1657返回列表
細胞蛋白殘留中，你遇到過哪些問題呢？HCP檢測試劑盒,解決宿主細胞蛋白殘留檢測！
什么是HCP？
宿主細胞蛋白(host cellprotein, HCP) 是指生物制品中來自生產細胞系的宿主細胞的蛋白成分, 既包括宿主細胞的結構蛋白也包括宿主細胞(傳代細胞)分泌的促生長因子等。HCP具有潛在的安全風險, 作為生物制品中的非目標成分，HCP可能引發機體未知的免疫應答而影響生物制品的功效，甚至引起超敏反應或其他不良反應。因此，建立合適的HCP檢測方法，有助于生物制品的質量控制，提高生物制品的使用安全性。
所有生物制劑的工藝開發的都必須經過HCP檢測，并證明已在純化過程中將它們降低到安全水平，一般要求每mg藥物HCP應當控制在ng范圍內。
《中華人民共和國藥典》2010年版第三部明確規定，CHO細胞殘余蛋白占總蛋白含量要小于0.05%以下才符合規定；美國FDA規定，用一種靈敏度較高的方法檢測藥品中的HCP，其含量應該低于檢測限（通常小于100ppm）。
ELISA是目前應用廣泛的HCP檢測方法，該方法操作相對簡單、精度良好，方便設定控制范圍和建立技術規范，中華人民共和國藥典2010年版三部中的HCP檢測均要求采用酶聯免疫法（ELISA）測定。
HCP ELISA的原理
HCP ELISA的原理是先將HCP抗體包被酶標板，孵育待測樣品，通過HCP抗體捕獲和富集樣品中HCP，再加入與包被酶標板的抗體種屬不同的，酶聯報告基團的HCP抗體，結合已被富集的HCP，通過底物顯色或熒光的方式成像，終定量計算HCP的含量。
典型針對HCP的夾心ELISA實驗
在藥物研發中，通常會建立通用和專屬的HCP ELISA方法。前期可以采用通用HCP ELISA試劑盒。到臨床實驗時，藥企會采用專屬試劑盒，即工藝特異HCP ELISA試劑盒，需要單獨純化HCP蛋白，免疫篩選抗體。
為什么要定制HCP檢測試劑盒？
目前生物制品行業多以商業化的通用型HCP ELISA試劑盒來檢測產品中的宿主蛋白殘留。但宿主細胞的分泌型蛋白和部分死亡細胞釋放的結構蛋白成分復雜，不同的工藝，加上相關基因產物需要經過獨特的翻譯后修飾，這些都導致不同生物制品中HCP的成分和比例有較大差異。使用通用型的HCP ELISA試劑盒，通常會缺乏特異性的評估，會帶來漏檢和檢測結果批間差過大的風險，從而對生物制品質量安全帶來風險。
只有根據不同的生產工藝，制備工藝特異的細胞蛋白標準品和特異的抗血清，建立相應的檢測方法，才能更真實反應供試品的細胞蛋白殘留量。
建立特異性HCP檢測方法費時且研發成本較高，但是研發成功后，可以獲得長期安全有效的保障；如果從大量使用角度考慮，成本也遠低于商業化的通用型ELISA試劑盒。
特別是對于藥企來說，藥物研發周期很長，成功率也很低，投入和產出不是直接劃等號的，在藥品研發的中后期，藥企也會非常關注生產工藝設計過程中HCP的控制。因為，藥物中HCP殘留量會影響臨床試驗效果。
HCP檢測試劑盒制備流程
空載體轉化宿主細胞，培養空載細胞系；
按正常生產流程純化空載細胞系培養物，可以省去后幾個步驟，以便盡可能保留HCP成分；
用HCP免疫合適的動物宿主，例如兔，山羊，綿羊或雞，通過級聯免疫（Cascade Immunization），大大提高抗體對微量蛋白質檢測的敏感性；
提取宿主產生的抗體，通過2D凝膠電泳/ Western印跡檢查抗原的覆蓋率；
篩選佳抗體及抗體組合；
配制夾心ELISA試劑盒。
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