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DNA凝膠成像的安全打開方式

發(fā)布時間:2019-02-14瀏覽次數(shù):1830返回列表

    瓊脂糖凝膠電泳分離技術是分子生物學實驗室進行分離、鑒定和提純DNA片段常用的方法。通過在制膠時摻入或制膠后染色的方式,使熒光染料結合在DNA分子上,在特定光源的照射下便可確定DNA分子的位置。

    早期,用于DNA瓊脂糖凝膠染色的染料多為EB(溴化乙錠),EB可以嵌入到DNA分子堿基對之間,在紫外光的激發(fā)下發(fā)出強的熒光。EB由于其靈敏度高、穩(wěn)定,而廣受歡迎。但由于EB為強誘變劑,具有高致癌性,實驗者在操作EB時往往“提心吊膽”。后期,EB逐漸被一些EB替代物如GoldView、GelRed、Gelsafe等所替代,此類替代物雖然毒性明顯比EB降低,但大部分仍還是采用紫外光激發(fā),實驗操作者在觀察凝膠尤其是切膠時還是會暴露在紫外下。我們知道紫外線照射,會導致基因突變,人體長時間接受紫外線的照射甚至會誘發(fā)皮膚癌。

    有沒有什么既安果又好的方法?有!那就是藍光成像

    藍光成像,顧名思議,采用藍光作為激發(fā)光源,所使用的與DNA結合的染料其佳激發(fā)波長在藍光波段。下面就讓小編給大家安利一下藍光成像的好處。

    安全

    常見的藍光染料,其致突變性遠低于EB數(shù)倍甚至數(shù)十倍。且此類染料佳激發(fā)波長多是在400-500nm的可見光,檢測時采用可見藍光激發(fā),整個凝膠檢測或回收過程中操作者無需暴露在紫外下, 避免紫外對人體損傷的可能。

    靈敏

    常見的藍光染料至少可檢測出20pg~50pg DNA,檢測核酸的靈敏度比EB染色法平均高10倍左右。SYBR Green I至少可檢出20pg DNA, 靈敏度比EB染色法高1025倍。

    不會造成DNA損傷

    紫外光會造成核酸突變、缺刻等,影響下游的PCR擴增效率、產(chǎn)物回收、連接轉(zhuǎn)化效率(某公司曾做過實驗,將1.25 kb的基因片段在紫外光下暴露2分鐘,再切膠回收、連接、轉(zhuǎn)化,結果發(fā)現(xiàn)平板上的克隆數(shù)幾乎為零)、RT-PCR擴增效率等。藍光作為一種可見光對DNA樣品無任何損傷,不會影響下游實驗。

 

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