目的： 建立高壓蒸汽滅菌生物指標(biāo)菌—嗜熱脂肪桿菌芽胞（ATCC7953）菌片的使用規(guī)程，保證正確使用，對高壓蒸汽滅菌效果進(jìn)行驗(yàn)證。
2. 依據(jù)： 高壓蒸汽滅菌生物指標(biāo)菌（嗜熱脂肪桿菌芽胞ATCC7953）菌片使用說明書。
3. 范圍： 本標(biāo)準(zhǔn)適用于用高壓蒸汽滅菌生物指標(biāo)菌—嗜熱脂肪桿菌芽胞（ATCC7953）菌片對高壓蒸汽滅菌效果進(jìn)行的監(jiān)測。
4. 職責(zé)： 高壓蒸汽滅菌操作人員、QA 檢查員、QC 微生物檢驗(yàn)員對本標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施負(fù)責(zé)。
5. 程序：
5.1. 采用生物滅菌指標(biāo)菌來檢查高壓蒸汽滅菌效果是科學(xué)、可靠的檢測方法。嗜熱脂肪桿菌芽胞 （ATCC7953 ） 是公認(rèn)的生物指標(biāo)菌。該菌具有以下特點(diǎn)： 5.1.1. 適生長繁殖溫度為56℃,培養(yǎng)24 小時(shí)即可形成菌落。
5.1.2. 該菌為需氧芽胞桿菌，其細(xì)菌繁殖體對培養(yǎng)基要求低，在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨瓊脂上呈米黃色。
5.1.3. 該菌，熱抗性穩(wěn)定，在4℃冰箱下保存6 個(gè)月抗力無明顯下降，在常溫下（20℃ 左右）可保存1 個(gè)月。 熱死亡時(shí)間為121℃，3.9 分鐘陽性，19 分鐘陰性，D 10 值1.3~1.9 分鐘,符合美國藥典規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。

5.2. 結(jié)構(gòu)：本生物指示劑由菌片、恢復(fù)培養(yǎng)基和外管組成，菌片由嗜熱脂肪桿菌芽胞（ATCC7953）制備而成，染菌量為5.0×10 5 ~5.0×10 6 cfu/片。

5.3. 使用方法： 5.3.1. 本生物指示劑培養(yǎng)器適用于各型壓力蒸汽滅菌器滅菌效果的監(jiān)測。
5.3.2. 使用時(shí)，將生物指示劑放入標(biāo)準(zhǔn)檢測包的中心或待滅菌物品包的中心，置于 滅菌器的規(guī)定位置。 3000 萬經(jīng)理人培訓(xùn)網(wǎng)站 5.3.3. 按規(guī)定的滅菌溫度和時(shí)間進(jìn)行滅菌處理。
5.3.4. 滅菌完畢，即刻將生物指示劑取出，蓋朝上垂直握于手中，用專門工具或一 夾子夾住菌管下部，將管內(nèi)安瓿擠碎，讓培養(yǎng)液流出浸沒菌片。然后將菌管放于56℃溫箱內(nèi)或配套的微型培養(yǎng)器內(nèi)培養(yǎng)24 小時(shí)觀察初步結(jié)果，48 小時(shí)觀察終結(jié)果。

5.4. 結(jié)果判定：培養(yǎng)后生物指示劑的培養(yǎng)液由紫色變?yōu)辄S色即表示有菌生長、判定為滅菌不合格；仍為紫色者為無菌生長，判定為滅菌合格。

5.5. 注意事項(xiàng)：
5.5.1. 生物指示劑管從壓力蒸汽滅菌器內(nèi)取出或從冰箱內(nèi)取出需在室溫下放 10min 左右，再夾碎安瓿，以免過熱或過冷夾碎外管。
5.5.2. 恢復(fù)培養(yǎng)液在56℃培養(yǎng)時(shí)間過長（72 小時(shí)以上），陽性管黃色容易消退，培養(yǎng)液逐漸干燥，應(yīng)注意每天觀察，隨時(shí)記錄陽性結(jié)果。

6. 附： 生物指標(biāo)菌測試滅菌效果記錄ZL0075 00。 供試品抑細(xì)菌抑真菌試驗(yàn)規(guī)程 目的： 建立供試品抑細(xì)菌和抑真菌試驗(yàn)的基本操作，以判定供試品有無抑菌性，為采用直接接種法或薄膜過濾法進(jìn)行無菌檢驗(yàn)提供依據(jù)。

2. 依據(jù)： 《中華人民共和國藥典》2000 年版二部。

3. 范圍： 本標(biāo)準(zhǔn)適用于供試品有無抑菌性的驗(yàn)證。

4. 職責(zé)： QC 無菌檢驗(yàn)員對本標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施負(fù)責(zé)。

5. 程序：
5.1. 實(shí)驗(yàn)用具： 電熱恒溫培養(yǎng)箱、試管、試管架、刻度吸管、注射器、針頭、砂輪、75%酒精棉球。

5.2. 培養(yǎng)基： 需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基（流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基） 真菌培養(yǎng)基。

5.3. 菌液：
5.3.1. 金黃色葡萄球菌菌液[CMCC（B）26003]：取金黃色葡萄球菌的營養(yǎng)瓊脂斜新鮮培養(yǎng)物1 白金耳，接種至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，在30-35℃培養(yǎng)16-18 小時(shí)后，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至每1ml 中含10-100 個(gè)菌。
5.3.2. 生孢梭菌菌液[CMCC（B）64941]：取生孢梭菌的需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基新鮮培養(yǎng)物1 白金耳，再接種至相同培養(yǎng)基內(nèi)，在30-35℃培養(yǎng)18-24 小時(shí)后，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至每1ml 中含10-100 個(gè)菌。
5.3.3. 白色念珠菌菌液[CMCC（F）98001]：取白色念珠菌的真菌瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物 1 白金耳，接種至真菌培養(yǎng)基內(nèi)，在 20-25℃培養(yǎng) 24 小時(shí)后，用 0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至每1ml 中含10-100 個(gè)菌。

5.4. 操作法：
5.4.1. 取經(jīng)過滅菌培養(yǎng)后的配制好的需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基2 管，各加入金黃色葡萄球菌菌液1ml，再向其中1 管加入規(guī)定量的供試品溶液。
5.4.2. 取經(jīng)過滅菌培養(yǎng)后的配制好的需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基2 管，各加入生孢梭菌菌液 1ml，再向其中1 管加入規(guī)定量的供試品溶液。
5.4.3. 取配制好經(jīng)過滅菌及培養(yǎng)后的真菌培養(yǎng)基2 管，各加入白色念珠菌1ml，向其中 1 管加入規(guī)定量的供試品溶液。
5.4.4. 需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基管置 30-35℃培養(yǎng)箱中，真菌培養(yǎng)基管置 20-25℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)3-5 天。
5.4.5. 培養(yǎng)期間內(nèi)應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長。

5.5. 結(jié)果判斷： 如培養(yǎng)基各管24 小內(nèi)微生物生長良好,則供試品無抑菌作用,如加供試品的培養(yǎng)基管與未加供試品的培養(yǎng)基管對照比較,微生物生長微弱緩慢或不生長,均判為供試品有抑菌作用。該供試品需用稀釋法或中和法、薄膜過濾法處理，消除供試品的抑菌性后，方可接種至培養(yǎng)基。
6. 附：供試品抑真菌抑細(xì)菌試驗(yàn)記錄ZL0080 00。