HYDS0023-100T 三色多重免疫熒光試劑盒（雙標三色）

產品/服務：HYDS0023-100T 三色多重免疫熒光試劑盒（雙標三色）
型號：HYDS0023-100T
品牌：古朵
單價：面議
更新日期：2023-11-29
有效期至：長期有效
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產品簡介

產品名稱：三色多重免疫熒光試劑盒（雙標三色），免疫熒光(immunofluorescence，IF)，通常是指用熒光標記的抗體示蹤或檢查樣品中相應抗原的方法。根據抗原抗體反應，將不影響抗原抗體相互作用的熒光分子標記在抗體上，與其相應的抗原反應后，在熒光顯微鏡下針對熒光標記分子的激發光發射光進行觀察，從而檢測目的指標的相對...

產品詳細介紹

免疫熒光(immunofluorescence，IF)，通常是指用熒光標記的抗體示蹤或檢查樣品中相應抗原的方法。根據抗原抗體反應，將不影響抗原抗體相互作用的熒光分子標記在抗體上，與其相應的抗原反應后，在熒光顯微鏡下針對熒光標記分子的激發光發射光進行觀察，從而檢測目的指標的相對含量、在組織細胞中的定位。

產品名稱：三色多重免疫熒光試劑盒（雙標三色）

原理介紹: 酪酰胺信號放大(TSA， Tyramide signal amplification)技術是一類利用辣根過氧化酶（ HRP）對靶蛋白進行標記的酶學檢測方法，類似常規免疫組化的 DAB 顯色方法， TSA 技術同樣采用 HRP 標記的二抗，同樣有對應的 “顯色”步驟（HRP 催化加入反應體系的酪胺熒光素底物，產生  活化熒光底物，活化底物可與抗原上的酪氨酸等殘基共價結合，使樣品上穩定的共價結合酪胺熒光    素。之后用熱修復法洗去非共價結合的一抗-二抗-HRP 復合物，重復下一種一抗-hrp二抗來第二輪孵育，換另一種酪胺熒光素底物，如此往復就可實現多重標記。
TSA 詳細原理是利用酪胺 Tyramide的過氧化物酶反應(酪胺鹽在 HRP 催化 H202 下形成共價鍵結合位點)，產生大量的酶促產物，該產物能與周圍的蛋白殘基(包括色氨酸、  組氨酸和酪氨酸殘基)結合，這樣在抗原-抗體結合部位就有大量的熒光素沉積，結果使其檢測信號得到 10-100 倍增強。  簡單來說，用這種方法做多重免疫熒光是利用二抗上帶有的 HRP （而不是直接偶聯熒光素），來催化后續  添加入體系的非活性熒光素。  熒光素在 HRP 和過氧化氫的作用下被活化，跟臨近蛋白的酪氨酸殘基共價偶聯，使得蛋白樣品與熒光素穩定結合。  然后微波或煮沸或者水浴等熱修復處理，前一輪非共價  結合的抗體被洗掉，共價結合的熒光素穩定共價結合在樣本切片蛋白上。  再換個一抗來第二輪孵育，周而復始。  等到所有抗體孵育結束，熒光素都結合好后，最后去檢測結果。  由于每次體系中都只有單  一抗體孵育，因此無需擔心抗體交叉反應，以及一抗二抗種屬匹配問題，大大減少了實驗設計時不同  種屬抗體選擇匹配的限制。  也就是說，如果用 TSA 技術，同一張片子上所有的靶標都可以選用特異性高的兔單克隆抗體。  搭配同一支抗兔的 HRP 二抗就可以進行實驗，而且信號放大的倍數大大增強。     本公司開發的試劑盒具體酪胺熒光染料為以下其中一種或者多種： 480， 520， 570 ， 620， 690，780， 488， CY3.此試劑盒中的熒光染料可單獨或配合使用。  可以實現單標、雙標、三標以及更多重熒光放大/多重同源抗體熒光標記等功能，極大豐富了此試劑盒的內涵。

產品名稱：三色多重免疫熒光試劑盒（雙標三色）
試劑盒組成： 488 熒光染料(綠光)(即用型， 5mL),-20℃； CY3 熒光染料（紅光）  (即用型， 5mL)， -20℃；   TSA+增強劑， 100ul，  -20℃ （可選）；
高敏多聚 hrp 山羊抗兔二抗（5mL） 4℃。
備注：  488 熒光染料、CY3 熒光染料在-20 度下，均為固體，使用之前需解凍。

產品名稱：三色多重免疫熒光試劑盒（雙標三色）
TSA+增強劑使用方法：  TSA+增強劑能夠進一步增強熒光信號放大液的放大信號 5-10 倍， TSA+增強劑：熒光放大液=1:500，使用 TSA+增強劑不是必須的選項，可以根據具體的情況選擇添加或者不選擇添加。
操作流程：
1、石蠟切片脫蠟至水：  依次將切片放入二甲苯 Ⅰ 15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇 Ⅰ5min-無水乙醇 Ⅱ。取出放在通風廚內，酒精晾干后放入自來水中稍洗，蒸餾水洗。
2、抗原修復：  組織切片置于盛滿 PH 9.0 EDTA 堿性抗原修復液或者 PH6.0 檸檬酸修復緩沖液的修復盒中于微波爐內進行抗原修復（也可以用高壓 1-2min 100 度水煮 15min 95 度水浴 20min等其他熱修復方法）  。中火 8min，停火 8min，轉中低火 7min，此過程中應防止緩沖液過度蒸發，切勿干片。  自然冷卻后將玻片置于 PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌 3 次，每次 5min。 (修復液和修復條件根據組織類型以及抗原類型來確定）  。
3 、阻斷內源性過氧化物酶：  切片放入 3%過氧化氫溶液，室溫避光孵育 15 min，將玻片置于 PBS （PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌 3 次，每次 5min。
4、 BSA 封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走），在圈內滴加用 3%BSA-PBS （或者其他封閉液）均勻覆蓋組織，室溫封閉 30min。
5、加一抗：  輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加用抗體稀釋液稀釋好的的一抗 X，切片平放于避光濕盒內 4°C 孵育過夜或者 37 度 1-2h。（濕盒內加少量水防止抗體蒸發）
6、加 hrp 二抗：  玻片置于 PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌 3 次，每次 5min。切片稍甩干后在圈內滴加與一抗相應種屬的hrp二抗覆蓋組織，避光室溫孵育 50min， PBS 洗三次。
7、熒光染料反應：  TYR-488 熒光染料（或者 TYR-CY3 熒光染料）反應 10-15min， PBS 洗三次。
8、重復 2-7 步驟（換用另外一種 TYR 熒光染料）
9、 DAPI 復染細胞核：  玻片置于 PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌 3 次，每次 5min。切片稍甩干后在圈內滴加 DAPI 染液，避光室溫孵育 10min。
10、    封片：  玻片置于 PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌 3 次，每次 5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
11、    鏡檢拍照：  切片于熒光顯微鏡/共聚焦/多通道熒光掃描儀/多光譜成像系統下觀察并采集圖像。

染料激發波長發射波長
DAPI 藍色 350 420
480 450 480
488 綠色 480-490 512-520
CY3 紅色 530-550 570-590
520 綠色 490 520
570 紅色 550 570
620 590 620
690 630 690
780 750 780

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