雞毒支原體PCR檢測(cè)試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域，雞毒支原體PCR檢測(cè)試劑盒是我司眾多優(yōu)質(zhì)動(dòng)物疫病PCR檢測(cè)試劑盒之一，質(zhì)量堪比同類進(jìn)口產(chǎn)品，價(jià)格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購(gòu)。...

特別提示：包括雞毒支原體PCR檢測(cè)試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：雞毒支原體PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱：MycopvpAma gallisepticum PCR Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：BTN11-1490
產(chǎn)品規(guī)格：50次

本產(chǎn)品根據(jù)MG特異性黏附蛋白編碼基因pvpA序列，設(shè)計(jì)了一對(duì)特異性檢測(cè)引物，基于PCR方法對(duì)雞毒支原體進(jìn)行快速檢測(cè)。雞毒支原體（MycopvpAma gallisepticum，MG）是引起雞慢性呼吸道病的主要病原，引起雞呼吸道黏膜卡他性炎癥及其他雞傳染性支氣管炎病毒感染等并發(fā)癥，導(dǎo)致肉雞胴體品質(zhì)下降，雞群死亡率增高，給養(yǎng)雞業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品DNA模板，操作簡(jiǎn)單。
2. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

產(chǎn)品組成：

組分	編號(hào)	規(guī)格(50T)
即用型PCR Mix 3.0	BTN90805	1.5mL
pvpA專一性引物對(duì)	yw13931394	100uL
pvpA陽(yáng)性對(duì)照	yw13951396	50uL
超純水	BTN00935	1mL

保存條件：-20℃保存，有效期一年。

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名稱：禽流感病毒(AIV-M)通用型單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒（定性/定量）
貨號(hào)：SYA320
規(guī)格：48次/盒|96次/盒
一、簡(jiǎn)介：
禽流感病毒實(shí)時(shí)熒光qRT-PCR檢測(cè)試劑是按照美國(guó)農(nóng)業(yè)部(USDA)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和我國(guó)《禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測(cè)方法》(GB/T 19438.1-2004)而制備的商業(yè)化檢測(cè)試劑盒。本試劑盒為中的探針報(bào)告基團(tuán)為6-FAM，淬滅基團(tuán)為MGB。本方法可定性檢測(cè)所有亞型禽流感病毒。

二、用途：
本試劑盒適用于檢測(cè)各種禽類喉咽棉拭子、泄殖腔棉拭子、各種組織樣品、尿囊液及細(xì)胞培養(yǎng)液等?？捎糜谇萘鞲胁《靖腥镜妮o助診斷、監(jiān)測(cè)及流行病學(xué)調(diào)查，其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

三、試劑盒組成：(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
熒光qRT-PCR反應(yīng)液(AIV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
無(wú)核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
陰性對(duì)照(NTC) 1 管 50μL/管
陽(yáng)性對(duì)照(AIV-PTC) 1 管 50μL/管

四、儲(chǔ)存條件及有效期：
本試劑盒于-18℃以下保存，有效期為6個(gè)月。

五、熒光PCR儀器適用范圍：
ABI系列，Roche系列等熒光定量PCR檢測(cè)儀等。

六、樣品的采集與RNA提取
6.1 樣品的采集
按照標(biāo)準(zhǔn)《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T 18936-2003 )和《禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測(cè)方法》(GB/T 19438.1-2004 )進(jìn)行樣品的采集。
6.2 樣品RNA提取
可按常規(guī)方法提取，也可采用商品化試劑盒提取病毒RNA。
（1） 取滅菌的1.5 mL Eppendorf離心管，做好標(biāo)識(shí)。
（2） 每管加入600 μL裂解液，分別加入被檢樣本200 μL，再加入200 μL氯f(wàn)ǎng，混勻器上振蕩混勻5 s，于4℃ 12000 r 離心15 min。
（3） 取無(wú)RNA酶的1.5 mL Eppendorf離心管，加入-20℃預(yù)冷400μL異丙醇，吸取步驟(2)各管中的上清液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)的管中，避免吸出中間層，顛倒混勻。
（4） 于4℃ 12000 r離心15 min，棄上清，倒置于吸水紙上，沾干液體；加入600μL 75％預(yù)冷乙醇，洗滌。
（5） 于4℃ 12000 r離心10 min，棄上清，倒置于吸水紙上，沾干液體。
（6） 10000 r離心10 s，用微量加樣器將其吸干，室溫干燥5 min～10 min。
（7） 加入10μL 無(wú)核酸降解酶的水，溶解管底的RNA，5000 r離心5 s，冰上保存?zhèn)溆?。若需長(zhǎng)期保存須放置-70℃ 冰箱。
 注：陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無(wú)需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽(yáng)性對(duì)照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽(yáng)性對(duì)照。

七、檢測(cè)步驟：
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光qRT-PCR反應(yīng)液(AIV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000r離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(AIV-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 real time RT-PCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
反轉(zhuǎn)錄(Reverse Transcription) 1循環(huán) 45℃ for 5 min
預(yù)變性 1循環(huán) 94℃ for 30 sec
PCR擴(kuò)增(PCR amplification ) 40循環(huán) 94℃ for 5 sec
60℃ for 30 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào) 。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。

八、結(jié)果分析：
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測(cè)結(jié)果?；€和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過(guò)正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2 試驗(yàn)成立判定
（1） 陰性對(duì)照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
（2） 陽(yáng)性對(duì)照(AIV -PTC)：均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
（3） 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足 ，否則，此次試驗(yàn)視為無(wú)效。
8.3 結(jié)果判定
（1） 在試驗(yàn)成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽(yáng)性，表明AIV核酸陽(yáng)性。
（2） Ct值顯示為無(wú)的樣本為陰性樣本，表明AIV核酸陰性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對(duì)于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，則為可疑陽(yáng)性，否則判為陰性。
（4） 對(duì)于可疑陽(yáng)性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行AIV qRT-PCR檢測(cè)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽(yáng)性，表明AIV核酸陽(yáng)性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項(xiàng)：
（1） 初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。并嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)步驟操作。
（2） 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含RNA酶。
（3） PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
（4） 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行，以免污染。
（5） 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。


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