HR8306-500T LDH細胞毒性檢測試劑盒
- 產品/服務：HR8306-500T LDH細胞毒性檢測試劑盒
- 型 號：HR8306-500T
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-11-21
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：1524
LDH細胞毒性檢測試劑盒是利用LDH催化乳酸生成丙酮酸和NADH，NADH通過電子載體將顯色劑還原生成顯色物質，在450nm處的OD值與LDH成正比，利用此原理可以測定死細胞和受損細胞的LDH漏出情況。...
LDH細胞毒性檢測試劑盒
產品編號：HR8306
產品組成：
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組份 |
500T |
1000T |
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組份A：LDH提取液A |
10mL |
20mL |
|
組份B：LDH反應液B |
5mL |
10mL |
儲存條件：
LDH反應液2-8℃避光保存，長期不用可-20℃保存，避免反復凍融。提取液2-8℃保存。有效期1年。
產品簡介：
LDH乳酸脫氫酶檢測試劑盒是利用LDH催化乳酸生成丙酮酸和NADH，NADH通過電子載體將顯色劑還原生成顯色物質，在450nm處的OD值與LDH成正比，利用此原理可以測定死細胞和受損細胞的LDH漏出情況。
LDH（乳酸脫氫酶）是存在于細胞質的一種酶，LDH釋放被看做細胞膜完整性的重要指標，并被廣泛用于細胞毒性檢測。當細胞膜受到損傷時，LDH會釋放到培養基中。由于釋放出的LDH穩定，檢測培養基中LDH的量可以作為測定死細胞和受損細胞數量的指標。
LDH細胞毒性檢測試劑盒檢測方法：
● 酶標儀 ● 分光光度計
樣本類型：
● 懸浮細胞 ● 貼壁細胞
試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 酶標儀/分光光度計 ● 離心機 ● 移液器 ● ● PBS緩沖液/HBSS（無酚紅） ● 96孔板
注意事項：
● LDH反應液凍存后溶解時注意重新混勻。
● 冷凍會使樣品中部分乳酸脫氫酶失活。建議樣品準備好后盡量當天完成測定。
● 因為每種細胞的LDH量不同，建議通過預實驗確定高LDH對照和低LDH對照的吸光度差異最大的細胞數。
● 培養基中動物血清中的LDH會增加背景吸收，建議設置一個培養基背景對照來校正。
● 動物血清中的LDH活性較高時，可以通過降低血清濃度來減小其中的LDH造成的背景吸收，一般將血清濃度降低到5%會顯著減小背景。
● 細胞過度生長、密度過高、離心速度過大、培養箱內外溫差過大，都會造成細胞釋放乳酸脫氫酶增加。
● 若需準確計算出漏出的LDH酶活性的絕對活性，請選用其它貨號的試劑盒。
● 不同樣本的LDH漏出情況不一樣，需要做預實驗確定加入LDH反應液后的孵育時間。
● 以下以96孔板培養為例，如果是使用的其它類型的培養板，以實際為準，等比例調整吸入對應規格的試劑即可。
● 因為每種細胞的LDH量不同，為了得到最好的顯色效果，推薦做預實驗確定最佳細胞量。沒條件做細胞數量優化的話，可以選擇較高細胞量實驗。
LDH細胞毒性檢測試劑盒使用方法：
關于對照孔設置：
● 一般按以下設置對照孔，僅供參考，也可以根據實驗需要自己設置：（例如加入100μL細胞懸液，加入藥物母液1-10μL。）
背景空白對照：保留兩個或三個孔，使其不添加細胞和藥物以用作背景空白對照。
向每個孔中添加110μL新鮮培養基。
待測樣品空白對照：使兩孔或三孔沒有細胞，添加培養基和待測藥物樣品用作樣品空白對照。
加入60μL新鮮培養基+ 50μL待測藥物樣品。
低LDH對照：使兩孔或三孔含有細胞，無添加藥物，用作低LDH對照。
加入60μL新鮮培養基+ 50μL細胞懸液。
高LDH對照：使兩或三孔含有細胞，無添加藥物，加入LDH提取液用作高LDH對照。
加入50μL新鮮培養基+ 50μL細胞懸液+10μL LDH提取液。
高LDH空白對照：使兩孔或三孔不含細胞，無添加藥物，加入LDH提取液用作高LDH空白對照。
加入100μL新鮮培養基+10μL LDH提取液。
表A：
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待測樣品 |
背景空白對照 |
待測樣品空白對照 |
低LDH對照 |
高LDH對照 |
高LDH空白對照 |
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培養基 |
10μL |
110μL |
60μL |
60μL |
50μL |
100μL |
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細胞 |
50μL |
- |
- |
50μL |
50μL |
- |
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藥物 |
50μL |
- |
50μL |
- |
- |
- |
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LDH提取液 |
- |
- |
- |
- |
10μL |
10μL |
LDH細胞毒性檢測試劑盒LDH測定：
1、吸取50μL用培養基稀釋過的細胞懸液至96孔板中。
【注】：
● 用貼壁細胞時，接種細胞至96孔板過夜預培養，換成新的50μL培養基后，進行操作步驟2。
2、加入50μL含有藥物的培養基（按表A）。
3、在37℃ CO2培養箱內培養合適的時間。
4、在高LDH對照孔、高LDH空白對照孔中加入10μL LDH提取液后，在樣品、樣品空白、低LDH對照孔和背景空白孔中加入10μL 培養基（按表A），在37℃ CO2培養箱內培養30-45分鐘。
【注】：
● 加入LDH提取液的孔用移液器輕輕吹打混勻，中間每隔10分鐘用移液器輕輕吹打混勻。
● LDH提取液比較粘稠，容易吸附在吸頭壁，一定要注意有效加入培養基并充分混勻。
● 可以根據樣品數量，按照每50μL培養基+10μL LDH提取液的比例預先多配制一些提取液的工作液，放大體積后提取液的終濃度會更加準確。
● 如果是其它培養體系，LDH提取液按孔中液體量10%加入即可。
5、96孔板離心2 min (250×g)，使懸浮細胞沉淀。
6、從每個孔中吸取100μL上清液至另一個新的96孔板中。
【注】：
● 為了避免吸出細胞，請小心吸取上清液。
7、在新的96孔板每個孔中加入10μL LDH反應液B后，在室溫避光的條件下培養30鐘-4小時。
【注】：
● 培養時間與預實驗在每孔中加入10μL LDH反應液，采用包裹鋁箔等方法避光，在室溫反應一致。
● 一般45分鐘-60分鐘反應時間即可。
● 如果是其它培養體系，LDH反應液按孔中液體量10%加入即可。
8、用酶標儀測定450nm的吸光度。
LDH計算：
計算待測樣品孔-樣品空白孔、高LDH對照孔-高LDH對照空白孔、低LDH對照孔-背景空白孔的吸光度后，算出各種孔的復孔平均值。
細胞損傷率/毒性根據如下公式算出。
細胞損傷率/死亡率/毒性(%) = [(ODA-ODC)/(ODB-ODC)]×100%
LDH細胞毒性檢測試劑盒其中：
ODA：樣品的吸光度(待測樣品孔-樣品空白孔)
ODB：高LDH對照的吸光度(高LDH對照孔-高LDH對照空白孔)
ODC：低LDH對照的吸光度(低LDH對照孔-背景空白孔)
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