HR9083 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色試劑盒(紅色熒光)
- 產(chǎn)品/服務(wù)：HR9083 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色試劑盒(紅色熒光)
- 型 號：HR9083
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-08-28
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：1074
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色試劑盒是利用E系列探針進行內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的E04內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色探針為紅色熒光標記的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)探針，具有586nm/616nm的激發(fā)/發(fā)射波長。...
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色試劑盒(紅色熒光)
產(chǎn)品編號：HR9083
產(chǎn)品組成：
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產(chǎn)品組成 |
100T |
200T |
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試劑A：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光E04染料 |
20μL |
20μL×2 |
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說明書 |
1份 |
1份 |
儲存條件：
染料-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。有效期6個月。
【注】：
● 染料短期2周內(nèi)可以2-8℃保存。染料長期不用可以-20℃保存。避免反復(fù)凍融。
● 染色液A為DMSO溶液，冬季氣溫較低時為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
● 可以用手捂住使其融解或37℃短時間水浴。吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色試劑盒(紅色熒光)產(chǎn)品簡介：
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色試劑盒是利用E系列探針進行內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的E04內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色探針為紅色熒光標記的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)探針，具有586nm/616nm的激發(fā)/發(fā)射波長。
E系列探針是一種細胞滲透型的對活細胞中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體進行選擇性染色的一類新型熒光染料，該系列探針可以選擇性標記內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。只需簡單孵育細胞，即可穿過細胞膜并直接聚集在活性內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上。可有效標記活細胞。一旦內(nèi)質(zhì)網(wǎng)被染色后，還能根據(jù)后續(xù)實驗的需求進行固定(醛類固定劑如甲醛)和透化(醛類去污劑如Triton X-100)，探針依然維持在細胞內(nèi)。
檢測方法：
● 熒光顯微鏡
● 激光共聚焦
樣本類型：
● 懸浮細胞
● 貼壁細胞
試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 熒光顯微鏡/激光共聚焦 ● 離心機
● PBS ● 或者HBSS(無酚紅)
注意事項：
● E04染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時在室溫時為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。
● 用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。
● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
● 標記的條件因細胞種類而異，根據(jù)不同樣本的實際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整，在每次實驗前，請先根據(jù)不同的實驗要求、細胞類型、細胞的膜通透性等進行優(yōu)化，確定最佳條件。以下方法僅供參考。
● 最好使用HBSS緩沖液(含Ca2+、Mg2+ Hank’s平衡鹽溶液)稀釋該探針進行染色，可得到最佳實驗結(jié)果。
● E04染料具有環(huán)境敏感性，工作液條件發(fā)生改變E04 會隨之出現(xiàn)極性增強、最大熒光波長偏移到更高波長處、量子產(chǎn)量下降等現(xiàn)象。
● 染色后立即進行分析。
● 操作過程中需要盡量避光。
使用方法：
1、染色工作液配制：
根據(jù)樣本數(shù)量，用37℃培養(yǎng)箱預(yù)熱HBSS或PBS或其他緩沖液將E04熒光染料500倍稀釋。配制成染色工作液。(對于后續(xù)需要做固定或透化的樣本，200倍稀釋)
【注】：
● 建議收到產(chǎn)品后，根據(jù)使用量，對母液進行小量分裝，每次使用一管，試劑-20℃避光凍存，一年穩(wěn)定。
● 開始實驗前，使用HBSS或培養(yǎng)基緩沖液稀釋儲存液到需要的工作濃度。工作濃度為根據(jù)不同細胞的預(yù)實驗結(jié)果確定的最佳工作濃度，一般染色終濃度為試劑盒中染料母液的500倍稀釋。
● 為了降低過度加載染料導致的潛在背景和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)毒性，在不影響實驗結(jié)果的前提下應(yīng)盡可能低濃度染色。另外，濃度過高也可能造成非特異性染色，對其他細胞結(jié)構(gòu)進行染色。
● 工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。
● 為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。
● 使用含Ca2+、Mg2+ Hank’s平衡鹽溶液(HBSS/Ca/Mg)稀釋該探針進行染色，可得到最佳實驗結(jié)果。
● 以下實驗方案經(jīng)牛肺動脈內(nèi)皮細胞優(yōu)化，且已被其他常規(guī)細胞系驗證。但不同細胞類型其最佳使用條件不同，還需用戶根據(jù)該方案進行進一步優(yōu)化染色濃度和時間。
2、細胞染色
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色試劑盒(紅色熒光)2.1 對于貼壁細胞
1)培養(yǎng)皿/培養(yǎng)板準備細胞樣本。
2)待細胞生長到合適豐度，吸除培養(yǎng)液，用HBSS緩沖液洗滌細胞，加入適量37℃預(yù)熱的含探針工作液。于生長狀態(tài)下孵育15分鐘～40分鐘(具體孵育時間需根據(jù)細胞類型而定，需預(yù)實驗優(yōu)化)。
【注】：
● 也可以將細胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上，加入合適培養(yǎng)基，使其爬片生長。
3)利用新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液。
【注】：
● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。
4)熒光顯微鏡(含合適濾片)或激光共聚焦顯微鏡下觀察。或者進行后續(xù)的固定步驟。
激發(fā)/發(fā)射波長為586/616nm。
2.2 對于懸浮細胞
1)用HBSS洗滌細胞。
2)利用37℃預(yù)熱的探針工作液重懸細胞，于生長狀態(tài)下孵育15分鐘～40分鐘(具體時間需根據(jù)細胞類型而定，需預(yù)實驗優(yōu)化)。
3)離心，吸除染色液，加入新鮮培養(yǎng)液重懸細胞。
4)置于熒光鏡下觀察?；蚣す夤簿劢癸@微鏡檢測。激發(fā)/發(fā)射波長為586/616nm?；蛘哌M行后續(xù)的固定步驟。
【注】：
● 對于懸浮細胞，也可將細胞貼附于經(jīng)細胞粘合劑處理過的蓋玻片上，然后使用類似于貼壁細胞的方法進行染色。
● 如果需要蓋玻片上固定化的細胞，那么可在鋪片前可以先用多聚賴氨酸(poly-D-lysine)包被載玻片或蓋玻片。
● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。
● 已染色細胞用醛固定后，僅部分E04探針留在細胞內(nèi)，熒光信號會有衰減。
常見問題分析：
● 可以對細胞進行固定嗎？
已染色細胞固定后，僅部分熒光探針留在細胞內(nèi)，熒光信號會有部分衰減。
● 固定細胞的方法？
染色后清洗，小心吸走清洗液。換用新鮮配制且預(yù)熱的含4%甲醛的緩沖液或培養(yǎng)液進行細胞固定。用4%甲醛于37℃固定細胞2min。 細胞固定后，可用合適緩沖液進行清洗，每次5min，共2次。清洗后可對細胞進行后續(xù)封片、鏡檢或進一步染色。
● 可以對細胞進行透化處理嗎？
不建議對細胞進行透化處理，因為經(jīng)Triton X-100或其它透化劑透化后，細胞內(nèi)將無熒光信號保留。
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