HR0275 細(xì)菌裂解液(免超聲)
- 產(chǎn)品/服務(wù)：HR0275 細(xì)菌裂解液(免超聲)
- 型 號(hào)：HR0275
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價(jià)：面議
- 更新日期：2023-08-24
- 有效期至：長(zhǎng)期有效
- 瀏覽次數(shù)：1092
本裂解液提取的蛋白可用于WB、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本裂解液提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。...
細(xì)菌裂解液(免超聲)
產(chǎn)品編號(hào)：HR0275
產(chǎn)品組成：
|
組份 |
50mL |
100mL |
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試劑A：細(xì)菌蛋白裂解液A |
50mL |
100mL |
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試劑B：蛋白酶抑制劑混合物B |
200μL |
400μL |
細(xì)菌裂解液(免超聲)儲(chǔ)存條件：
裂解液2-8℃保存；蛋白酶抑制劑-20℃保存。有效期1年。
【注】：
● 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋前也可以2-8℃保存，開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
● 蛋白酶抑制劑從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。
使用限制：本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
細(xì)菌裂解液采用優(yōu)質(zhì)原料配制，用于細(xì)菌菌體的裂解，用于細(xì)菌蛋白提取，裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western等下游實(shí)驗(yàn)。
本裂解液提取的蛋白可用于WB、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。
本裂解液提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。
本裂解液中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。
本裂解液提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請(qǐng)使用我司其他貨號(hào)的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理（貨號(hào)HR0389）。
試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 離心機(jī) ● 振蕩器 ● 渦旋混勻器 ● 移液器 ● PBS ● 蛋白定量試劑盒
使用注意事項(xiàng)：
● 螺旋蓋微量管裝試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。
● 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。
● 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
● 如果試劑盒不能短時(shí)間用完，蛋白酶抑制劑混合物不可一次全部加入提取液。
● 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
使用方法：
1、裂解液的準(zhǔn)備：
根據(jù)所需提取的樣本量，每500μL裂解液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。
2、在4℃,10000g條件下將菌液離心5min，棄上清，盡量吸干剩余液體，收集菌體。
3、用PBS洗菌體2次。若為冷凍菌體直接進(jìn)行下面操作步驟即可。
4、按每50-100mg濕重菌體樣本加入500μL裂解液，吹打混勻，置搖床室溫振蕩30-45分鐘。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。
● 如果沒(méi)有低溫振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。
5、在4℃ 10000×g條件下將菌液離心5分鐘，將上清移入干凈離心管。
6、即得到細(xì)菌蛋白樣品。
7、將細(xì)菌總蛋白樣品定量后分裝置于-80℃冰箱或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。
【注】：
● 建議用BCA方法進(jìn)行蛋白定量。相關(guān)產(chǎn)品：HR0329。
● 蛋白樣品-80℃存放一年沒(méi)問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。
細(xì)菌裂解液(免超聲)常見(jiàn)問(wèn)題分析：
● 蛋白濃度低？
膜蛋白豐度比較低，處理部分樣本時(shí)可能沒(méi)有裂解完全，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑A的處理時(shí)間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒(méi)有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
● 用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭┲泻懈蓴_Bradford 法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過(guò)透析處理或者用脫鹽柱改換過(guò)緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
● 提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒(méi)有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。
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