O32過氧化氫熒光探針具有極高的H2O2反應(yīng)特異性，與其它類型的活性氧反應(yīng)較少。在激發(fā)波長(zhǎng)488nm，發(fā)射波長(zhǎng)526nm附近，用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡等檢測(cè)綠色熒光，從而測(cè)定細(xì)胞內(nèi)過氧化氫水平。...

冰凍切片過氧化氫(H₂O₂)檢測(cè)試劑盒

 

產(chǎn)品編號(hào)：HR8809

產(chǎn)品組成：

儲(chǔ)存條件：

探針-20℃避光保存；清洗液2-8℃保存，有效期6個(gè)月。

【注】：

● 探針短期內(nèi)經(jīng)常使用可以2-8℃保存。

● 長(zhǎng)期不用-20℃保存。避免反復(fù)凍融?？梢愿鶕?jù)需要分裝后凍存。

● 染色液A為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短時(shí)間水浴。吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。

冰凍切片過氧化氫(H₂O₂)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明：

過氧化氫（H₂O₂，Hydrogen peroxide）是體內(nèi)的一種活性氧(Reactive oxygen species, ROS)狀態(tài)，參與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程。

過氧化氫檢測(cè)試劑盒是利用過氧化氫特異性熒光探針過氧化氫探針O32檢測(cè)過氧化氫的試劑盒。過氧化氫探針O32是本公司合成的苯蒽類熒光探針，可以自由穿過細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后，與細(xì)胞內(nèi)過氧化氫反應(yīng)，被氧化生成綠色熒光物質(zhì)，綠色熒光強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)過氧化氫水平成正比，檢測(cè)綠色熒光就可以知道細(xì)胞內(nèi)過氧化氫的變化情況。

O32過氧化氫熒光探針具有極高的H₂O₂反應(yīng)特異性，與其它類型的活性氧反應(yīng)較少。在激發(fā)波長(zhǎng)488nm，發(fā)射波長(zhǎng)526nm附近，用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡等檢測(cè)綠色熒光，從而測(cè)定細(xì)胞內(nèi)過氧化氫水平。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

● 使用方便：可用熒光顯微鏡直接觀察；

● 背景低，靈敏度高；

● 線性范圍寬，使用方便。

檢測(cè)方法：

● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦顯微鏡

樣本類型：

● 新鮮冰凍切片

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 熒光顯微鏡，激發(fā)波長(zhǎng)488 nm，發(fā)射波長(zhǎng)520 ± 10 nm，或者按照FITC熒光檢測(cè)條件檢測(cè)

● 離心機(jī) ● 移液器 ● PBS緩沖液 ● 或者HBSS（無酚紅）

使用注意事項(xiàng)：

● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

● 盡量縮短探針標(biāo)記后到測(cè)定所用的時(shí)間，以減少各種可能的誤差。

● 對(duì)于某些樣本，如果熒光太強(qiáng)，可以按照1:200-1:1000稀釋探針。探針標(biāo)記的時(shí)間也可以根據(jù)情況在20-60分鐘內(nèi)適當(dāng)進(jìn)行調(diào)整。

● 盡量縮短探針標(biāo)記后到測(cè)定所用的時(shí)間，以減少各種可能的誤差。

● 過氧化氫O32探針在光照和空氣中易被氧化，注意避光密封保存。

● O32染色工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用，并且在當(dāng)天用完。

● O32對(duì)濕度非常敏感，若是O32溶液每次取完需要量后，必須緊緊密封蓋子。建議根據(jù)單次用量，分裝密封保存。不可使用含水的吸頭。

● 對(duì)不同的組織，應(yīng)選擇合適的孵育時(shí)間和濃度，以觀察過氧化氫的變化，很多細(xì)胞內(nèi)的過氧化氫絕對(duì)水平較低，需要根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間。

● 過氧化氫O32探針可以根據(jù)需要的用量分裝后凍存，避免反復(fù)凍融。

● 過氧化氫O32探針不可以一次性全部稀釋后長(zhǎng)期保存不用，稀釋后穩(wěn)定性變差，有效期縮短。

● 以下操作步驟僅供參考，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際樣本情況調(diào)整。

冰凍切片過氧化氫(H₂O₂)檢測(cè)試劑盒使用方法：

試劑配制：

1、根據(jù)樣本數(shù)，用純水將O32過氧化氫熒光探針200倍稀釋，配成染色工作液。

2、用純水將10×清洗液10倍稀釋，配成1×清洗液工作液。

探針標(biāo)記：

1、準(zhǔn)備待測(cè)的厚為10μm 的未經(jīng)固定處理的冰凍切片。

【注】：

● 建議使用新鮮組織（手術(shù)切除后1小時(shí)內(nèi)）制成的冰凍切片。

● 不新鮮的樣本可能檢測(cè)不到過氧化氫。

2、室溫下，小心加上200μL清洗液工作液，鋪滿整個(gè)切片表面，靜置5-10分鐘。

3、小心吸除清洗液。

4、滴加100μL染色工作液，在37℃培養(yǎng)箱避光孵育20-60分鐘。

【注】：

● 最好在濕盒中孵育，避免液體蒸發(fā)。

5、移除染色液。

6、用PBS洗滌切片2-3次。

7、加蓋玻片或甘油封片。

8、熒光顯微鏡檢測(cè)。

【注】：

● 染色完成后，立即進(jìn)行熒光定性分析。

● 激發(fā)波長(zhǎng)488nm，發(fā)射波長(zhǎng)525nm。

● 熒光強(qiáng)，表明過氧化氫（H2O2）含量高。

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