HR8841 羥基自由基(·OH)檢測試劑盒(O27,綠色熒光)
- 產(chǎn)品/服務：HR8841 羥基自由基(·OH)檢測試劑盒(O27,綠色熒光)
- 型 號：HR8841
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-08-24
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：909
本試劑盒可以用于各種真核培養(yǎng)細胞的羥基自由基的快速定性檢測。通過熒光強度的大小來快速確定具體的干預措施（如養(yǎng)分缺失、缺氧、藥物治療或遺傳基因操控等）如何影響細胞的羥自由基變化，羥自由基增加的樣本熒光強度大。...
羥基自由基(·OH)檢測試劑盒(O27,綠色熒光)
產(chǎn)品編號：HR8841
產(chǎn)品組成：
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組份 |
100T |
200T |
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羥基自由基（?OH）熒光探針O27 |
100μL |
100μL×2 |
儲存條件：
-20℃避光保存，有效期1年。
【注】：
● 長期不用-20℃避光保存，避免反復凍融，可以根據(jù)需要分裝后凍存。
● 探針為DMSO溶液，冬季氣溫較低時為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
● 可以用手捂住使其融解或37℃短時間水浴。吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預熱，否則容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。
羥基自由基(·OH)檢測試劑盒(O27,綠色熒光)產(chǎn)品簡介：
羥基自由基（?OH）檢測試劑盒是一種利用羥基自由基（?OH）特異性綠色熒光探針O27進行羥基自由基檢測的試劑盒。O27可自由透過活細胞膜進入細胞內(nèi)，并被細胞內(nèi)的羥基自由基（?OH）氧化，產(chǎn)生綠色熒光產(chǎn)物。根據(jù)活細胞中綠色熒光的產(chǎn)生，可以判斷細胞羥基自由基（?OH）含量的多少和變化。用流式細胞儀或熒光顯微鏡可直接觀察，是一種快速簡便的組織或培養(yǎng)活細胞中羥基自由基（?OH）檢測方法。
在激發(fā)波長488nm，發(fā)射波長525 nm附近，使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計、熒光酶標儀、流式細胞儀等檢測熒光，從而測定細胞內(nèi)羥基自由基（?OH）水平。
本試劑盒可以用于各種真核培養(yǎng)細胞的羥基自由基的快速定性檢測。通過熒光強度的大小來快速確定具體的干預措施（如養(yǎng)分缺失、缺氧、藥物治療或遺傳基因操控等）如何影響細胞的羥自由基變化，羥自由基增加的樣本熒光強度大。
產(chǎn)品特點：
● 使用方便：可用激光共聚焦顯微鏡直接觀察、熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測；
● 背景低，靈敏度高；
● 線性范圍寬，使用方便。
檢測方法：
● 熒光酶標儀 ● 熒光分光光度計 ● 流式細胞儀 ● 熒光顯微鏡● 激光共聚焦
樣本類型：
● 懸浮細胞 ● 貼壁細胞
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：
● 激光共聚焦顯微鏡或熒光分光光度計或酶標儀或流式細胞儀，激發(fā)波長488 nm，發(fā)射波長525 nm
● 離心機 ● PBS緩沖液 ● 或者HBSS（無酚紅） ● 熒光專用黑色96孔板
使用注意事項：
● 螺旋蓋微量管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。
● 熒光探針標記后，一定要洗凈殘余的未進入細胞內(nèi)的探針，否則會導致背景較高。
● 探針標記完畢并洗凈殘余探針后，可以進行激發(fā)波長的掃描和發(fā)射波長的掃描，以確認探針的標記情況是否正常。
● 盡量縮短探針標記后到測定所用的時間，以減少各種可能的誤差。
● O27探針在光照和空氣中易被氧化，注意避光密封保存。
● 對不同的細胞，應選擇合適的孵育時間，以觀察羥自由基的變化。
● 由于染色工作液穩(wěn)定性比較差，染色工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用，并且在當天用完。
● 探針對濕度非常敏感，若是探針溶液每次取完需要量后，必須緊緊密封蓋子。建議根據(jù)單次用量，分裝密封保存。不可使用含水的吸頭。
● 羥基自由基（?OH）熒光探針O27母液請擰緊螺旋蓋，避免受潮失效。
● 必須使用熒光檢測專用的黑色96孔板。
羥基自由基(·OH)檢測試劑盒(O27,綠色熒光)使用方法：
O27探針標記：
1、O27溶液可在新鮮無血清培養(yǎng)基、HBSS緩沖液、PBS緩沖鹽溶液稀釋到所需濃度，1000倍稀釋，以此染色工作液更換細胞培養(yǎng)基；也可直接向細胞孵育液體中加入O27探針溶液至所需濃度。
【注】：
● 建議收到產(chǎn)品后，根據(jù)單次使用量，對母液進行分裝，每次使用一管，試劑-20℃避光凍存，一年穩(wěn)定。
● 開始實驗前，使用HBSS緩沖液或無血清培養(yǎng)基稀釋染料儲存液到需要的工作濃度。工作濃度應根據(jù)不同細胞的預實驗結(jié)果確定的最佳工作濃度，建議至少在超過10倍范圍的濃度下進行測試。一般染色終濃度500-2000倍稀釋，1000倍適合大多數(shù)細胞樣本。
● 不能用含有血清的培養(yǎng)基稀釋探針。
● 工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。
2、依據(jù)細胞羥自由基含量的不同，孵育時間可選擇15-60分鐘，在37℃或室溫進行避光孵育。
3、孵育結(jié)束后，用新鮮溶液清洗細胞。
4、用相關儀器進行熒光檢測。
【注】：
● 熒光強，羥自由基強度高。
對于原位標記探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡直接拍照分析，或收集細胞后用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測。
對于收集細胞后標記探針的樣品可以用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測，用激光共聚焦顯微鏡直接拍照分析也可以。
使用488 nm激發(fā)波長，525 nm發(fā)射波長，實時或逐時間點檢測刺激前后熒光的強弱變化。
熒光顯微鏡檢測：
1、對貼壁生長細胞或活組織，可直接在熒光顯微鏡下染色拍照分析；
2、對懸浮生長細胞，染色后取25-50μL細胞懸液滴到一張顯微載玻片上，再蓋上一張蓋玻片。
3、熒光顯微鏡檢測。
流式細胞儀分析：
1、對貼壁生長細胞，用胰酶消化制備成單細胞懸液；對懸浮生長細胞，直接收集細胞。用0.5～1mL冰冷PBS重懸細胞（5～10萬）。
2、采用488nm波長激發(fā)，測定525 nm的發(fā)射，羥自由基強度高的細胞有較強的綠色熒光。
常見問題分析：
● 結(jié)果如何分析？
通過設置參照樣本，以參照樣本的倍數(shù)來反映目標樣本相對含量變化，這個“相對”是針對參照的。分析結(jié)果是定性的，也是沒有單位的，因為它本質(zhì)上是一個比值（目標/參照）。反映的是模型樣本通過具體的干預措施（如養(yǎng)分缺失、缺氧、藥物治療或遺傳基因操控等）如何影響其羥自由基的變化，測定其羥自由基是增加或者降低了。
● 熒光照片如何分析？
需要有相關的熒光強度分析軟件。羥自由基表達水平直接通過熒光信號的強弱和分布范圍來提現(xiàn)。
有的顯微鏡掃描下來的圖像本身就可以測面積和強度，可以同時測不同顏色的熒光強度。有的顯微鏡不支持此功能，可以將熒光染色彩色圖像轉(zhuǎn)換為黑白的灰度圖，然后再以灰度值作為測量指標進行分析。
要結(jié)合明場的照片具體分析。如果細胞分布均勻可以算固定面積熒光強度，成像時中心和四周有差異時，一般將四周剪切掉也可以。如果細胞分布不勻，需要找到細胞分布勻稱的視野，一個視野一個視野的找。
如果要用圖片做結(jié)果，就要平行做多個圖片，做分析，統(tǒng)計，每張都要求熒光分布盡量一致。
為了去除雜光的影響，可以適當調(diào)節(jié)統(tǒng)計熒光的強度范圍，將信號過弱的背景雜光去除掉。對照組和實驗組整張圖片需要做同樣的處理，保證所有參數(shù)均要一致。
對于不同情況熒光強度的統(tǒng)計方法，根據(jù)實驗需要或參考文獻。可以算等面積的平均強度；也可以算閾值高于一定值的平均強度；也可以算熒光的累積而不算平均。要根據(jù)課題需要選擇合適的測量統(tǒng)計方法。
● 熒光照片效果不好？
熒光拍照存在很多變量，沒一個變量都會嚴重影響拍照效果。
熒光拍攝條件：拍攝環(huán)境、顯微鏡品牌和激發(fā)熒光決定了鏡下觀察的效果。同樣的操作方法和切片，在不同品牌顯微鏡下顯示出完全不同的熒光強度。
熒光衰減：熒光物質(zhì)的衰減通常哦度是非常明顯的。同樣的一組切片。1小時內(nèi)拍攝和8小時后拍攝，熒光效果完全不同。
最好用激光共聚焦顯微鏡，激光共聚焦顯微鏡的分辨率比普通熒光顯微鏡要高得多，通常同一張片子激光共聚焦的效果明顯更優(yōu)。
● 背景熒光比較高？
在沒有細胞外酯酶和其他氧化酶的情況下，熒光隨時間的逐漸增加可能是來自自發(fā)水解，導致水解的原因可能與大氣氧化或光誘導氧化有關。
● 熒光強度在變化？
可以觀察到熒光的逐漸增加（由于自動氧化）貨減少（由于細胞中的染料損失或光漂白）。在沒有任何刺激或誘導的情況下，健康的未經(jīng)處理的細胞中的熒光突發(fā)可以指示細胞死亡或一些其他氧化事件的進展。
注意檢測時平行操作即可。
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