HR0612 Ca2+鈣離子染色試劑盒(F03綠色熒光)
- 產品/服務：HR0612 Ca2+鈣離子染色試劑盒(F03綠色熒光)
- 型 號：HR0612
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-08-24
- 有效期至：長期有效
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F03細胞內鈣離子染色試劑盒是利用F系列Ca2+鈣離子熒光探針進行鈣離子特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的F03細胞內鈣離子染色探針為綠色熒光標記的鈣離子探針,具有505/525nm的最大激發/發射波長。...
Ca2+鈣離子染色試劑盒(F03綠色熒光)
產品編號：HR0612
產品組成：
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組份 |
50-500T |
100-1000T |
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試劑A：F03鈣離子染料 |
50μL |
50μL×2 |
儲存條件：
染料-20℃避光保存，有效期6個月。
【注】：
● 染料短期2周內可以2-8℃保存,長期不用可以-20℃保存,避免反復凍融。
● 染色液A為DMSO溶液,冬季氣溫較低時為凝固狀態,極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解,變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
● 可以用手捂住使其融解或37℃短時間水浴,吸頭也需要放在培養箱預熱,否則容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。
Ca2+鈣離子染色試劑盒(F03綠色熒光)簡介：
F03細胞內鈣離子染色試劑盒是利用F系列Ca2+鈣離子熒光探針進行鈣離子特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的F03細胞內鈣離子染色探針為綠色熒光標記的鈣離子探針,具有505/525nm的最大激發/發射波長。
F03具有極高的細胞滲透性,經過簡單孵育即可實現細胞加載。穿透細胞膜進入細胞后被細胞內的酯酶剪切形成不易透過細胞膜的F03新產物,從而被滯留在細胞內。F03游離配體幾乎是非熒光性的,其熒光不會隨鈣離子濃度升高而增強。但是,當它與細胞內鈣離子結合后可以產生較強的熒光,熒光會增加60至100倍,被激發后可以發出綠色的熒光,具有很高的淬滅常數和激發態壽命。最大激發波長為505nm,最大發射波長為525nm。實際檢測時推薦使用的激發波長為488nm左右,發射波長為515-530nm?？梢允褂脽晒怙@微鏡、酶標儀、激光共聚焦顯微鏡或流式細胞儀檢測細胞內鈣離子濃度的變化。
F03熒光探針采用可見光激發,與傳統的紫外光激發的熒光探針相比,儀器的適用范圍更廣泛,具有更強的探針吸收性能,使得更低濃度的探針即可成功檢測Ca2+變化,從而降低了對活細胞的光毒性,檢測敏感度更高。
以96孔板每孔200μL染色液計,本試劑盒小包裝可以染色50-500個樣本。
檢測方法：
● 流式細胞儀 ● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦
樣本類型：
● 懸浮細胞 ● 貼壁細胞
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：
● 熒光顯微鏡/激光共聚焦/流式細胞儀 ● 離心機 ● 移液器 ● PBS ● HBSS
使用注意事項：
● 螺旋蓋微量試劑管裝試劑開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體收集至管底,避免開蓋時液體灑落。
● F03染色液為DMSO溶液,冬季氣溫較低時在室溫時為凝固狀態,極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解,吸頭也需要放在培養箱預熱,否者容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。
● 用前,將本品取出回溫至室溫,并對其進行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。
● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
● 染色后立即進行分析。
● 本染色液可用于細胞涂片、細胞的檢測。
● F03探針在水中的穩定性比較差,染色工作液必須現配現用,并且在當天用完。
● F03探針對濕度比較敏感,每次取完需要量后,必須緊緊密封蓋子。建議根據單次用量,分裝密閉保存。不可使用含水的吸頭。
● 試劑A母液請擰緊螺旋蓋,避免受潮失效。
● 可在染色溶液中加入等體積的20% Pluro
● 標記條件因細胞的種類而異,據不同樣本實際染色結果做相應調整,每次正式實驗前先摸索一下細胞量、鈣離子熒光探針的終濃度、培養時間等,找到最佳實驗條件。以下方法僅供參考。
Ca2+鈣離子染色試劑盒(F03綠色熒光)使用方法：
1、染色工作液的配制：
根據樣本數量,用37℃培養箱預熱的HBSS將F03熒光染料200-1000倍稀釋,配制成染色工作液。
【注】：
● 也可以用相應的無血清培養基稀釋F03染料至所需濃度。
● 開始實驗前,使用HBSS緩沖液或無血清培養基稀釋染料儲存液到需要的工作濃度。工作濃度應根據不同細胞的預實驗結果確定的最佳工作濃度,建議至少在超過10倍范圍的濃度下進行測試。一般染色終濃度500-1000倍稀釋,500-1000倍適合大多數細胞樣本。
● 建議收到產品后,根據單次使用量,對母液進行小量分裝,每次使用一管,試劑-20℃避光保存,一年穩定。
● 工作液需現配現用,避免反復凍存。
● 為了降低探針加載過度可能引起的假陽性,建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。
● 若細胞在染色后不含染料的培養基中孵育,熒光信號會衰減。
2、細胞染色
懸浮細胞染色
（1）用PBS洗滌細胞2次。
【注】：
● 500×g離心5分鐘。根據實驗室平時離心細胞的離心力離心。
（2）加入適量體積的染色工作液重懸細胞,使其密度大約為1×106/mL。
（3）在37℃孵育細胞20分鐘,不同的細胞最佳培養時間不同。可以用20分鐘作為起始孵育時間,之后優化體系以得到均一的標記結果。
【注】：
● 若染色不夠充分,建議增加染料濃度或延長染色時間。
（4）加入5倍體積的含有1%胎牛血清的HBSS,再繼續孵育40分鐘。
（5）孵育結束,500×g離心5分鐘。
【注】：
● 以下步驟均為洗滌細胞。根據實驗室平時離心細胞的離心力和時間進行離心。
（6）棄上清液,再次緩慢加入37℃預熱的HBSS重懸細胞。
（7）重復（5）,（6）步驟兩次。
（8）加入HBSS重懸細胞,在37℃下再繼續孵育20分鐘。
（9）然后用該細胞進行熒光鈣離子檢測。
貼壁細胞染色
（1）用PBS洗滌細胞2次。
（2）細胞培養板中或細胞爬片上加入適量體積的染色工作液。
【注】：
● 96孔細胞培養板每孔加入100μL染色液即可。
（3）37℃孵育細胞20-60分鐘,不同的細胞最佳培養時間不同?？梢杂?0分鐘作為起始孵育時間,之后優化體系以得到均一的標記結果。
【注】：
● 若染色不夠充分,建議增加染料濃度或延長染色時間。
（4）吸干染色工作液,用HBSS洗培養板或蓋玻片2-3次,每次用預熱的HBSS覆蓋所有細胞,然后吸干培養基。
（5）加入HBSS,在37℃下再繼續孵育20分鐘。
（6）然后用該細胞進行熒光鈣離子檢測。
3、用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測。
激發波長為488nm,最大發射波長為525nm。
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