組織/細(xì)胞質(zhì)蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從細(xì)胞和動(dòng)物組織制備胞漿蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在1 小時(shí)內(nèi)完成。制備的胞漿蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研...

組織/細(xì)胞質(zhì)蛋白提取試劑盒

 

產(chǎn)品編號(hào)：HR0023

產(chǎn)品組成：

組織/細(xì)胞質(zhì)蛋白提取試劑盒儲(chǔ)存條件：

蛋白提取液、磷酸酶抑制劑2-8℃保存，蛋白酶抑制劑-20℃保存，有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

● 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

產(chǎn)品說(shuō)明：

組織/細(xì)胞質(zhì)蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從細(xì)胞和動(dòng)物組織制備胞漿蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在1 小時(shí)內(nèi)完成。制備的胞漿蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白，下游應(yīng)用范圍廣，提取液裂解細(xì)胞的能力較溫和，需要根據(jù)實(shí)際樣本情況優(yōu)化裂解時(shí)間。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請(qǐng)使用其他貨號(hào)的試劑盒（相關(guān)產(chǎn)品HR0165）。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理（相關(guān)產(chǎn)品HR0389）。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

● 使用方便，從細(xì)胞/組織提取蛋白不需經(jīng)過(guò)研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

● 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。

● 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

● 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

● 蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。

● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

適用樣本：

● 細(xì)胞 ● 組織

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 離心機(jī) ● 振蕩器 ● 勻漿器/Dounce勻漿器 ● 渦旋混勻器 ● 移液器

● PBS ● 蛋白定量試劑盒

組織/細(xì)胞質(zhì)蛋白提取試劑盒使用注意事項(xiàng)：

● 預(yù)實(shí)驗(yàn)很重要。必須要做預(yù)實(shí)驗(yàn)，在正式實(shí)驗(yàn)之前取少量樣本優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，并像正式樣本一樣認(rèn)真進(jìn)行，看實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否可行，實(shí)驗(yàn)條件是否適合自己的樣本。由于生物樣本的多樣性，不同樣本的實(shí)驗(yàn)條件通常差異較大，同種細(xì)胞的不同模型下需要的實(shí)驗(yàn)條件也可能不同，為了避免浪費(fèi)正式樣本和試劑，一定要提前預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。

● 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

● 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

● 如果試劑盒不能短時(shí)間用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

使用方法：

細(xì)胞胞漿蛋白提取：

1、提取液制備：

每500μL冷的胞質(zhì)蛋白提取液A 加入2μL蛋白酶抑制劑混合物和2μL磷酸酶抑制劑，充分混勻。

【注】：

● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。磷酸酶抑制劑可以一次加入。

● 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2、取5-10×10⁶個(gè)細(xì)胞，在4℃，500×g力條件下離心5分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。

3、用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4、每20μL體積細(xì)胞沉淀（約20mg，2×10⁶個(gè)細(xì)胞）中加入150-200μL冷的提取液A，高速渦旋振蕩混勻或吹打混勻，置2-8℃條件振蕩20-30分鐘。

【注】：

● 提取液A處理后細(xì)胞體積應(yīng)減少，否則延長(zhǎng)提取液A振蕩處理時(shí)間。

● 根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以稍微減少試劑A的用量，以提高獲得的胞漿蛋白樣品的濃度。

● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

● 沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

5、然后在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。

6、將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到胞質(zhì)蛋白。

7、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

● 建議用BCA法進(jìn)行蛋白定量。相關(guān)產(chǎn)品：HR0329。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

組織胞漿蛋白提?。?

1、提取液制備：

每500μL冷的胞漿蛋白提取液A加入2μL蛋白酶抑制劑混合物和2μL磷酸酶抑制劑，充分混勻。

【注】：

● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。磷酸酶抑制劑可以一次加入。

● 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2、取適量組織樣本用手術(shù)剪刀盡可能剪碎，每20mg組織中加入150-200μL冷的提取液A，用組織勻漿器勻漿至無(wú)明顯肉眼可見(jiàn)固體。

3、將勻漿液吸出，置2-8℃條件振蕩20-30分鐘。

【注】：

● 提取液A處理后細(xì)胞體積應(yīng)減少，否則延長(zhǎng)提取液A振蕩處理時(shí)間。

● 根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以稍微減少試劑A的用量，以提高獲得的胞漿蛋白樣品的濃度。

● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

● 沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

4、再次高速渦旋振蕩5秒，然后在4℃，12000×g力條件下離心10分鐘。

5、將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到胞質(zhì)蛋白。

6、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

● 建議用BCA法進(jìn)行蛋白定量。相關(guān)產(chǎn)品：HR0329。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

常見(jiàn)問(wèn)題分析：

● 蛋白濃度低？

處理部分組織樣本時(shí)可能沒(méi)有裂解完全，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑A的處理時(shí)間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒(méi)有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

● 細(xì)胞裂解速度慢？

為了充分保證提取得到的蛋白的活性，提取液采用獨(dú)特的保護(hù)蛋白的配方，裂解能力溫和，下游應(yīng)用范圍廣。適當(dāng)延長(zhǎng)裂解的時(shí)間即可。

● 用什么方法定量蛋白？

建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過(guò)透析處理或者用脫鹽柱改換過(guò)緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

● 提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒(méi)有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

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