本產(chǎn)品適用于從各種抗凝或非抗凝全血樣本中提取總蛋白。過程簡單方便，可在1小時內(nèi)完成。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒含有的獨特配方能夠溶解細(xì)胞膜包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降...

血液蛋白快速提取試劑盒(離心柱法)

 

產(chǎn)品編號：HR0213

產(chǎn)品組成：

儲存條件：

蛋白酶抑制劑-20℃保存；蛋白提取液、蛋白稀釋液2-8℃保存；離心柱室溫保存。有效期1年。

【注】

● 蛋白酶抑制劑未開蓋前也可以2-8℃保存，開蓋使用后-20℃保存。

● 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

血液蛋白快速提取試劑盒(離心柱法)簡介：

本產(chǎn)品適用于從各種抗凝或非抗凝全血樣本中提取總蛋白。過程簡單方便，可在1小時內(nèi)完成。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒含有的獨特配方能夠溶解細(xì)胞膜包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含高濃度鹽成分，不可直接用于2D電泳。如下游實驗需直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用其他貨號試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。

產(chǎn)品特點：

● 使用方便，將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。

● 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

● 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性。

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 移液器 ● 離心機 ● 振蕩器 ● 渦旋混勻器 ● PBS ● 蛋白定量試劑盒

使用注意事項：

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

● 全血蛋白濃度較高，需進(jìn)行稀釋后用于下游實驗。也可不稀釋，根據(jù)定量濃度調(diào)整下游應(yīng)用上樣量。

使用方法：

1、提取液制備：

每500μL蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】

● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

● 蛋白樣品用于測定某些蛋白酶活性等下游實驗時，注意根據(jù)實際情況調(diào)整抑制劑混合物是否加入。

● 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2、取300μL全血樣品，加入300μL冷的蛋白提取液，充分混勻后，在4℃條件下振蕩10分鐘。

【注】

● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動即可。

● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，在4℃靜置，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

3、將離心柱內(nèi)柱套上套管，將提取液吸入離心柱內(nèi)柱，在4℃，10000×g條件下離心3-5分鐘。

【注】

● 離心柱用于濾除固體顆粒物雜質(zhì)，對蛋白質(zhì)無吸附。

● 液體可以自由流穿離心柱，注意內(nèi)柱套上套管后再加入提取液。

4、收集套管內(nèi)液體即得到全血總蛋白。

5、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?

【注】

● 建議用BCA法進(jìn)行蛋白定量。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

● 所得全血蛋白樣品為紅色。

● 根據(jù)需要將蛋白樣品稀釋至所需濃度使用。全血蛋白的濃度極高，需要根據(jù)定量情況進(jìn)行大比例稀釋后再進(jìn)行下游應(yīng)用。

血液蛋白快速提取試劑盒(離心柱法)常見問題分析：

● 用什么方法定量蛋白？

建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑E 中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

● 提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

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