HR8200-50T 酵母內質網提取試劑盒
- 產品/服務：HR8200-50T 酵母內質網提取試劑盒
- 型 號：HR8200-50T
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-08-09
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：927
酵母內質網提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種酵母樣品中提取內質網。提取過程簡單方便。本試劑盒不能用于冷凍樣品的內質網提取。本試劑盒可以用于完整內質網提取相關的實驗，也可以用于下游內質網蛋白提取等實驗。...
酵母內質網提取試劑盒
產品編號：HR8200
產品組成：
|
組份 |
50T |
100T |
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組份A：酵母內質網提取液A |
20mL |
40mL |
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組份B：酵母內質網提取液B |
25mL |
50mL |
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組份C：酵母內質網提取液C |
20mL |
40mL |
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組份D：酵母洗滌液D |
50mL |
100mL |
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組份E：內質網保存液E |
20mL |
40mL |
酵母內質網提取試劑盒儲存條件：
2-8℃保存，有效期1年。
【注】：
● 酵母洗滌液長期不用時-20℃保存。
產品簡介：
內質網存在于除哺乳動物成熟的紅細胞外的各種真核細胞中。內質網為由生物膜構成的互相通連的片層隙狀或小管狀系統，膜片間的隙狀空間稱為池，通常與細胞外隙和細胞漿基質之間不直接相通。這種細胞內的膜性管道系統一方面構成細胞內物質運輸的通路，另方面為細胞內各種各樣的酶反應提供廣闊的反應面積。內質網的功能與蛋白質的合成、糖類和脂類的合成、解毒、同化作用有關，并且還具有運輸蛋白質的功能。
酵母內質網提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種酵母樣品中提取內質網。提取過程簡單方便。
本試劑盒不能用于冷凍樣品的內質網提取。
本試劑盒可以用于完整內質網提取相關的實驗，也可以用于下游內質網蛋白提取等實驗。
本試劑盒需要使用高速離心，沒有高速離心的條件時，可以選擇低速離心法內質網提取試劑盒。
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：
● 離心機 ● 振蕩器 ● 移液器 ● 離心機 ● 渦旋混勻器 ● PBS ● 100μm細胞篩
使用注意事項：
● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
● 要求離心力50000×g 的離心，沒有條件的話可以采用30000×g -50000×g 離心力，最好能達到45000×g 左右。最小離心力需要保證30000×g。
● 如果需要回收所有光面內質網小泡，最后一個離心步驟的離心力需要提高到100000×g力。
● 離心機轉速有相對離心力（RCF，×g）和每分鐘轉速（RPM）兩種表示方式，有些離心機設置有RPM 和×g 顯示切換，但部分離心機沒有自動切換功能。需要用下面的公式進行換算：g=r×1.118×10-5×rpm2（r為有效離心半徑，即從離心機軸心到離心收集管底部中心位置的長度，單位為厘米) 例如: 轉速為3000rpm，有效離心半徑為10cm，則相對離心力（RCF，×g）為=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）
酵母內質網提取試劑盒使用方法：
1、酵母培養物，在4℃，1000×g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集酵母沉淀。
2、用PBS洗滌酵母兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
【注】：
● 在1000×g離心5 分鐘。
3、每100μL體積或100mg濕重酵母沉淀物中加入400μL 酵母內質網提取液A，混勻后，在30℃條件下保溫15分鐘。
【注】：
● 酵母數量根據實驗情況調整，每次的裂解液用量并不是一定的，請根據實際情況調整。
4、在1000×g條件下離心5-10分鐘，收集酵母沉淀。
5、用300μL酵母洗滌液D洗滌酵母一次，離心收集酵母。
6、酵母沉淀物中加入500μL酵母內質網提取液B，充分混勻后。
【注】：
● 根據酵母細胞量調整提取液用量，一般加菌體體積的2-5倍均可。
● 按酵母菌體體積每100μL或100mg濕重菌體加入250-500μL提取液。
7、在37℃或室溫條件下輕微振蕩60-90分鐘。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。
● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔10分鐘用移液器吹打混勻。
● 不同酵母樣本需要的時間差異較大，根據下游細胞裂解的難易程度調整，如果下游試劑C處理后沉淀沒有明顯減少，需要延長此步驟處理時間。可以延長至2小時。
8、在2000×g條件下離心5-10分鐘，棄上清，收集沉淀。
9、沉淀用300μL酵母洗滌液D洗滌兩次。離心收集沉淀。
10、在沉淀中加入400μL酵母內質網提取液C，充分混勻，然后在振蕩器上振蕩10-30分鐘。
【注】：
● 用振蕩器/搖床的較低轉速，保持提取液有輕微晃動即可。
● 沒有振蕩器的話，在4℃靜置，稍微延長處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。
● 試劑C 處理后沉淀應減少，否則延長處理時間。
11、在4℃，500×g條件下離心5 分鐘，棄沉淀，收集上清。
12、將上清吸入另一干凈離心管。
13、在4℃，11000×g條件下離心20分鐘。棄沉淀，收集上清。
14、將上清在4℃，50000×g力條件下離心45分鐘。棄上清，收集沉淀。
【注】：
● 如果條件允許，可將離心力加大到100000×g，有利于提高光面內質網小泡回收率。
● 如果用大的離心轉頭，液體量太少不好離心的話，可以添加PBS增加液體量。
● 沒有高速離心的條件時，可以選擇低速離心法內質網提取試劑盒（相關產品HR9110）。
15、在沉淀中加入200-400μL內質網保存液E，混勻。
【注】：
● 也可不用試劑盒中的內質網保存液重懸，根據下游實驗需要選擇合適的緩沖液重懸內質網或直接用于下游實驗。
● 需要提取內質網蛋白時可以直接在沉淀中加入適量蛋白裂解液進行裂解。
16、在4℃，50000×g條件下離心20分鐘。棄上清，收集沉淀。即得到酵母內質網樣品。
17、根據下游實驗需要，將沉淀用相應的緩沖溶液重懸。置冰箱備用或直接用于下游實驗。
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