SY0294 耐熱逆轉錄酶II
- 產品/服務：SY0294 耐熱逆轉錄酶II
- 型 號：SY0294
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-08-09
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：929
產品簡介
耐熱逆轉錄酶II由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于科研目的，我公司的耐熱逆轉錄酶II品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括耐熱逆轉錄酶II在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：耐熱逆轉錄酶II
英文名稱：Reverse Trans
產品貨號：SY0294
產品規格：2000U
Reverse Trans
活性定義：以Poly(rA) Oligo(dT)為模板/引物，在37℃，10min內，摻入1 nmol的dTTP為酸不性溶物質所需要酶量定義為1個活性單位（U）。
質量控制
核酸外切酶殘留檢測：200 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在37 oC下孵育1h，DNA的電泳譜帶不發生變化。
核酸內切酶殘留檢測：200 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在37 oC下孵育1h，DNA的電泳譜帶不發生變化。
RNase殘留檢測：200 U本品和1 μg小鼠肝臟總RNA在37 oC下孵育1h，RNA電泳譜帶不發生變化。
功能檢測1：逆轉錄體系中加入200 U本品，以100 pg Hela cell total RNA為模板，Oligo(dT)23為引物，50 oC反應30min。取10% cDNA產物進行PCR擴增β-actin基因。瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，可見有單一的550 bp條帶。
功能檢測2：逆轉錄體系中加入200 U本品，以500 ng Hela cell total RNA為模板，Oligo(dT)23為引物，55 oC反應45min。取10% cDNA產物進行PCR擴增Polε基因。瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，可見有單一的4.8 kb (GC-rich)條帶。
功能檢測3：逆轉錄體系中加入200 U本品，以1 pg-1 μg Hela cell total RNA為模板，Oligo(dT)23VN和Random Hexamers為引物，測試qRT-PCR 性能。以6個數量級的模板量的對數值對Ct值做標準曲線，R2>0.990，斜率在-3.20到-3.60之間。
準備工作
1. 防止RNase污染：請保持實驗區域潔凈；操作時需穿戴干凈的手套、口罩；實驗所用的離心管、槍頭等耗材均需保證RNase free。
2. 引物選擇：
2.1 后續實驗為PCR
a, 如果模板為真核生物來源，一般情況下選Oligo dT18，與真核生物mRNA的3’Poly A尾配對，可獲得zuì高產量的全長cDNA。
b, 基因特異性引物 (GSP)的特異性zuì高。但有些情況下，用于PCR反應的GSP無法有效引導鏈cDNA合成。這時，可改用Oligo dT18或Random hexamers重新進行逆轉錄。
c, Random hexamers特異性zuì低，所有RNA，包括mRNA, rRNA, tRNA均可以作為Random hexamers的模板。當目標區域具有復雜二級結構或GC含量較高，或者模板為原核生物來源，使用Oligo dT18或基因特異性引物 (GSP)無法有效引導cDNA合成時，可使用Random hexamers為引物。
2.2 后續實驗為qPCR
a, 將Oligo dT18與Random hexamers混合使用，可使mRNA的各個區域均能以相同效率引發cDNA合成，有助于提高定量結果的重復性。
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