SY0562 Hoechst 33258 染液
- 產品/服務：SY0562 Hoechst 33258 染液
- 型 號：SY0562
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-08-09
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：987
產品簡介
Hoechst 33258 染液的品牌是百奧萊博，是優質的探針標記及檢測產品，本制品用于生化實驗研究等領域，我公司專注于探針標記及檢測產品的研發、生產和供應，為您提供的Hoechst 33258 染液質量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產品。...
產品詳細介紹
特別提示：包括Hoechst 33258 染液(1mg/ml)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：Hoechst 33258 染液(1mg/ml)
產品貨號：SY0562
產品規格：1ml|10mg|50ml
Hoechst 33258 是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，它在嵌入雙鏈 DNA 后釋放強烈的藍色熒光，對細胞的毒性較低。Hoechst 33258 常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。也可以用于普通的細胞核染色，或常規的DNA染色?？捎糜诠潭毎蚪M織的細胞核染色，也可用于活細胞或組織的細胞核染色。
分子式：C25H24N6O·3HCl
分子量：533.88
CAS：23491-45-4
純度：≥95%（HPLC）
儲存條件：-20℃避光干燥，有效期一年。
結構式
注意事項
1) Hoechst 33258 對人體有一定刺激性，請注意適當防護。
2) 熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。
3) 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。
4) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
根據您的關注的Hoechst 33258 染液(1mg/ml)(23491-45-4)，您可能還對以下產品有需求：
名稱：PCR法DNA探針標記試劑盒
貨號：BTN90604A
規格：5次
PCR標記的原理是用帶標記的dNTP進行PCR，zuì后得到的PCR產物將帶有標記，可以直接用于雜交試驗。其原理示意圖如下：
產品特點：
1.一站式，本試劑盒提供經過優化的試劑，不需要用戶自己摸索。
2. 足夠10次50μl體系的常規PCR(用于制備標記反應的模板和設置對照反應)和5次50μl體系的標記反應。
3.一次標記可以得到μg級的雙鏈DNA探針或約700ng的單鏈DNA探針，足夠多次雜交實驗用。
4. 既可用于制備雙鏈探針，也可以用于單鏈探針。
5. 90604A需自備含標記核苷酸的dNTP，90604B和90604C分別含生物素和地gāo辛標記的底物。自備的標記包括fluorescein-dUTP、hydroxycoumarin-dUTP、resorufin-dUTP和aminoallyl-dUTP等。
6. 本產品得到的探針參入率一般為4-5%(每100個核苷酸中有4-5個將帶有非同位素標記)，有效降低了空間阻礙，檢測效果zuì佳。
7.可以用于Southern和Northern Blot、原位雜交、菌落和斑點印跡雜交等分析。
試劑盒組成：
| 成分 | 規格 |
| 2×標記專用PCR Mix | 500μl |
| dNTP，2mM each | 50μl |
| 含Biotin-11-dUTP的dNTP | 25μL(僅B有) |
| 含DIG-11-dUTP的dNTP | 25μL(僅C有) |
| 超純水 | 1ml |
| 說明書 | 1份 |
注：標記專用PCR Mix不含dNTP。
儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
一：準備工作
1. 按常規的方法設計PCR引物，使探針長度在400-800bp之間。過短則標記參入少，探針雜交信號強度減弱；過長則非特異雜交增加，背景變強。
2. 根據PCR引物優化PCR條件。
3. 由于標記的dNTP比較珍貴，所以本試劑盒不推薦以基因組DNA或其他復雜DNA為模板直接進行PCR標記，而是建議采取下述的兩步法標記來提高成功率，即先制備非標記PCR產物，再以之為模板制備標記的PCR產物。
二：非標記PCR產物的制備
4. 設置50μL PCR的反應體系：
| 成份 | 用量 |
| 2×標記專用PCR Mix | 25μl |
| dNTP，2mM each | 5μl |
| 自備的探針引物一(10pmol/μL) | 1μL(10μM) |
| 自備的探針引物二(10pmol/μL) | 1μL(10μM) |
| 自備的模板DNA | 1μg基因組DNA或1ng質粒DNA |
| 超純水 | 補到50μL |
5. 按已經優化的PCR參數進行PCR。
6.電泳檢測和膠回收所需的PCR產物，并定量。用10 pmol引物一般能得到1μg左右的PCR產物(具體取決于PCR產物的長度)。注意：zuì好采取膠回收而不是PCR回收以避免殘留引物干擾后續的標記PCR。
三：標記PCR反應(zuì好做一個不加標記的對照用于定量)
說明：在設置下面反應時，如果加一種引物，就得到單鏈標記的PCR產物；如果加兩種引物，則得到雙鏈標記的PCR產物。由于雙鏈PCR探針在雜交前雖然要變性成單鏈后使用，但雜交時變性的雙鏈彼此還會復性，這種復性會與探針-靶DNA雜交反應相競爭，降低雜交效率，因此強烈推薦使用單鏈標記的DNA探針。
| 成份 | 樣品 | 對照 |
| 2×標記專用PCR Mix | 25μl | 25μl |
|
含Biotin-11-dUTP的dNTP或 含DIG-11-dUTP的dNTP或 自備的含其他標記dUTP的dNTP | 5μl | 不加 |
| dNTP，2mM | 不加 | 5μl |
|
雙鏈標記：探針引物一和引物二 單鏈標記：探針引物一或引物二 |
每種50 pmol 一種50 pmol |
每種50 pmol 一種50 pmol |
|
上步膠純化所得PCR產物 (單鏈標記可用100ng) | 10 ng | 10 ng |
| 超純水 | 補到50μL | 補到50μL |
注意：本試劑盒提供的dNTP混合物中，標記底物與非標記底物的比例已經進過優化，如果自備標記dUTP，其與dTTP的zuì佳比例需要優化，標記不同，比例不同。對DIG-11-dUTP，zuì佳比例1：3；對BrdUTP，zuì佳比例為1：1。
7. 按第5步的PCR參數進行標記PCR，但需要進行下列修改：一是循環數增加到35-55個循環。由于模板為純化后的PCR產物，探針對擴增長度完整性要求不高(長度不均的探針由于能形成網絡結構，效果反而更好)，所以可以增加循環數；二是延伸時間增加15秒，因為標記dUTP參入到DNA的速度比常規的dTTP慢；三是降低復性溫度5-7℃，因為標記核苷酸參入到DNA后，新模板的Tm值將降低。
8. 標記探針的定量：取標記反應和對照反應的產物1-5μl，在瓊脂糖凝膠上跟濃度已知的DNA marker一起電泳，并判斷探針的濃度。由于標記反應的PCR產物中額外帶有非同位素的配體(生物素，地gāo辛等)、因此其泳動速度將慢于非標記PCR產物(但同位素標記不能用此法)。
注意：如果擴增的是單鏈DNA探針，其結合EB的能力遠低于雙鏈DNA(EB是嵌合到雙鏈堿基對之間的，而單鏈DNA沒有堿基對，只有一些局部區域折疊形成的有限雙鏈區，因此能結合的EB很少)，因此EB染色的強弱不能準確反應DNA的濃度，可以采用銀染定量(跟marker比較)。一般100ng模板按上述條件經過單鏈PCR擴增可得到700ng左右探針。
9. 剩余的PCR標記產物可以不經過純化，直接加入(對單鏈PCR探針)雜或加熱變性并急冷后加入(對雙鏈PCR探針)到雜交液中使用。如果暫時不用請放-20℃長期保存。如果需要純化，請使用乙酸銨/乙醇沉淀法。
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