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特別提示：包括植物線粒體提取試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產品名稱：植物線粒體提取試劑盒
英文名稱：Plant Mitochondrion Extraction Kit
產品貨號：XH005
產品規(guī)格：50T|100T

本試劑盒可用于從植物葉片組織中分離出完整而純化的線粒體。適合于田間采摘或者實驗室培養(yǎng)的植物葉片中線粒體的制備。其制備物，可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究。但不適用于進一步DNA提取。

試劑盒組成：

組份	50T	100T
Lysis Buffer	100mL	200mL
β-巰基乙醇	1mL	1mL
Mito-Wash Buffer	25mL	50mL
Store Buffer	5mL	10mL

保存條件：4℃可保存3個月，長期保存可置-20℃。

操作步驟：
1．樣本采集前處理：無論田間自然生長還是實驗室組織培養(yǎng)，采摘前須避光生長24-48小時，以減少葉片組織中糖類及葉綠體含量。取適量Lysis Buffer，加入0.5% β-巰基乙醇，10ml Lysis Buffer加入50μlβ-巰基乙醇，混勻，形成Lysis Buffer/β-巰基乙醇溶液，此溶液可2～8度保存一個月。
2．葉片用蒸餾水清洗2-3次，濾紙吸干，有條件請用液氮研磨葉片1-2克，研磨完后，取800mg左右研磨的葉片粉，加入1.5ml預冷的Lysis Buffer/β-巰基乙醇溶液，混勻。如果無條件（無液氮），請預冷研缽，取洗過的葉片1000mg，用剪刀剪為碎塊放入玻璃勻漿器或者研缽中。加入1.5ml預冷的Lysis Buffer/β-巰基乙醇溶液，冰上研磨至看不見明顯組織塊；
3．將研磨物放置合適的離心管，4℃，1000×g離心5min；
4．將上清轉移到一新的離心管中，在沉淀中加入0.5ml Lysis Buffer/β-巰基乙醇溶液，混勻，再次4℃，1000×g離心5min，取上清；合并兩次上清，將上清4℃ 1000×g再次離心5min。
5．取上清，加入一新的離心管中，4℃，16,000×g離心10min。離心后的上清含胞漿成分，可從中提取胞漿蛋白。將上清轉移到新離心管，線粒體沉淀在管底。
6．在線粒體沉淀中加入0.5mL Wash Buffer重懸線粒體沉淀，4℃，1000×g離心5min；
7．取上清，加入一新的離心管中，4℃，16,000×g離心10min。棄上清，高純度的線粒體沉淀在管底；
8．用50 -100μL Store Buffer或合適的反應緩沖液重懸線粒體沉淀，立即使用或-70℃保存。

注意事項：
1．以離心力g計算正確的離心速度，不同的離心機可據此計算離心速度。
2．進行Western Blot和2D-膠電泳，可直接在第7步的沉淀中加入上樣緩沖液裂解線粒體。
3．β-巰基乙醇有毒，請注意通風及防護。

一般低溫度心機都有離心力顯示，如果沒有，可以用以下公式簡單的換算。
  G＝1.11×(10^-5)×R×[rpm]²
G為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數來表示；[rpm]²即：轉速的平方；R為半徑，單位為厘米。

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