SY0321 1×RIPA裂解液
- 產品/服務：SY0321 1×RIPA裂解液
- 型 號：SY0321
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-08-09
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：962
產品簡介
1×RIPA裂解液是高品質的蛋白質研究產品，由北京百奧萊博供應，本產品用于科研試驗，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多1×RIPA裂解液等蛋白質研究產品請聯系我司咨詢訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括1×RIPA裂解液(強)(不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：1×RIPA裂解液(強)(不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑)
英文名稱：1×RIPA Lysis Buffer (Strong),without enzyme inhibitors
產品貨號：SY0321
產品規格：100ml
本品為裂解強度相對較強的RIPA裂解液（1×），裂解得到的蛋白樣品可用于常規的Western、IP等實驗。RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)，其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一種傳統的細胞組織快速裂解液，對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強裂解作用。根據其裂解液的強度不同，大致可以分為強、中、弱三類。
注意事項
1）本品不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑，使用前請根據實驗情況添加合適酶抑制劑。
2）裂解樣品的所有步驟均需在冰上或4℃進行。
3） 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定其蛋白濃度（SY0298）。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
(一) 培養細胞樣品：
1）融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF等抑制劑，使PMSF的zuì終濃度為1mM。
【注】：請根據實驗情況選用酶抑制劑。
2）貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。
懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。
3）充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入150μl裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200μl或250μl。
（二）組織樣品：
1）把組織剪切成細小的碎片。
2）融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF等抑制劑，使PMSF的zuì終濃度為1mM。
【注】：請根據實驗情況選用酶抑制劑。
3）按照每20mg組織加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。)
4）用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5）充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6）如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
【注】：RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物，屬正?，F象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續實驗；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉錄因子。
儲存條件：-20℃，避免反復凍融，有效期12個月。
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儲存條件：低溫運輸，4℃保存一周，-20℃保存6個月。
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貨號：YT043
規格：50-100次
本試劑盒用于快速便捷分離培養細胞線粒體，在分離線粒體的同時可以獲得去除線粒體的細胞漿蛋白，可用于研究細胞色素c等線粒體蛋白向胞漿的釋放。
使用本試劑盒分離獲得的線粒體純度較高，并且大部分分離獲得的線粒體都含有完整的內膜和外膜，并具有線粒體的生理功能。因此本試劑盒分離得到的線粒體可以用于線粒體的生理功能等方面的研究。例如可以使用百奧萊博的YT148線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-1)測定分離得到的線粒體的膜電位。
本試劑盒分離得到的線粒體也可以被試劑盒中的線粒體裂解液或其它適當裂解液裂解后用于SDS-PAGE、Western、雙向電泳等蛋白分析。
本試劑盒提供了線粒體制備過程中勻漿程度的重要判斷指標，即臺盼藍染色，使分離得到的線粒體的質量更加有保證。臺盼藍染色液為選用試劑，在實驗條件成熟后可以不必使用。
本試劑盒提供了蛋白酶抑制劑PMSF，使勻漿時蛋白酶的活性被適當抑制，這樣在獲得線粒體的同時還可以獲得有時有用的去除了大量線粒體的蛋白，在進行蛋白或酶活分析時可以作為對照。如果每個樣品的細胞數量為2000-5000萬，本試劑盒可以處理50-100個樣品。
試劑盒組份：
線粒體分離試劑———125ml
臺盼藍染色液————10ml
線粒體儲存液————15ml
線粒體裂解液————15ml
PMSF(晶體)—————可配制1.5ml 100mM PMSF
PMSF(溶劑)—————1.5ml
注意事項：
1. 試劑盒中的試劑對于不同的實驗目的不必全部使用。
2. 如果不是用于制備線粒體蛋白樣品，線粒體分離試劑和線粒體裂解液中不必加入PMSF。
3. 如果用于制備線粒體蛋白樣品，線粒體分離試劑和線粒體裂解液中需添加PMSF。PMSF一定要在線粒體分離試劑或線粒體裂解液加入到樣品中前2-3分鐘內加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。
4. 分離線粒體的所有步驟均需在冰上或4℃進行，所用溶液需冰浴或4℃預冷。
5. 通常在分離線粒體時前后兩次離心速度選取600g和11,000g，如果希望純度更高，但對線粒體的得率要求不高，前后兩次離心速度可以采用1000g和3500g。
6. 臺盼藍與PMSF對人體有毒，請注意小心防護。
儲存條件：-20℃，有效期一年。
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