1×RIPA裂解液是高品質(zhì)的蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科研試驗(yàn)，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價(jià)格，深為用戶(hù)稱(chēng)道，了解更多1×RIPA裂解液等蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品請(qǐng)聯(lián)系我司咨詢(xún)訂購(gòu)。...

特別提示：包括1×RIPA裂解液(強(qiáng))(不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱(chēng)：1×RIPA裂解液(強(qiáng))(不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑)
英文名稱(chēng)：1×RIPA Lysis Buffer (Strong),without enzyme inhibitors
產(chǎn)品貨號(hào)：SY0321
產(chǎn)品規(guī)格：100ml

本品為裂解強(qiáng)度相對(duì)較強(qiáng)的RIPA裂解液（1×），裂解得到的蛋白樣品可用于常規(guī)的Western、IP等實(shí)驗(yàn)。RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)，其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液，對(duì)動(dòng)物細(xì)胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用。根據(jù)其裂解液的強(qiáng)度不同，大致可以分為強(qiáng)、中、弱三類(lèi)。

注意事項(xiàng)

1）本品不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑，使用前請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況添加合適酶抑制劑。
2）裂解樣品的所有步驟均需在冰上或4℃進(jìn)行。
3） 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定其蛋白濃度（SY0298）。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
4）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說(shuō)明：

(一) 培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
1）融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF等抑制劑，使PMSF的zuì終濃度為1mM。
【注】：請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況選用酶抑制劑。
2）貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。
懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬(wàn)細(xì)胞/管，然后再裂解。
3）充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量說(shuō)明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200μl或250μl。

（二）組織樣品：
1）把組織剪切成細(xì)小的碎片。
2）融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF等抑制劑，使PMSF的zuì終濃度為1mM。
【注】：請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況選用酶抑制劑。
3）按照每20mg組織加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)
4）用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5）充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6）如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
【注】：RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過(guò)超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測(cè)一些常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄因子，例如NF-kappaB、p53等時(shí)，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子。

儲(chǔ)存條件：-20℃，避免反復(fù)凍融，有效期12個(gè)月。

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貨號(hào)	名稱(chēng)	規(guī)格
BTN130507	鎳柱原位清潔試劑盒	20次
BTN101102	改良Lowry法蛋白定量試劑盒	1000次
BTN130530	His標(biāo)簽蛋白專(zhuān)用蛋白酶抑制劑	10mL
BTN81203	SDS-PAGE電泳液(干粉)	5L
BTN100829	中pH緩沖液套裝	30次
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SNM385	包涵體蛋白溶解液	100ml

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名稱(chēng)：亮抑蛋白酶胎溶液(10mg/mL)
貨號(hào)：BTN100836
規(guī)格：1mL
本產(chǎn)品是濃度為10mg/mL水溶液。工作濃度為0.5mg/mL。其作用是抑制絲氨酸和巰基蛋白酶，如胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、組織蛋白酶B、血纖維蛋白溶酶、激肽釋放酶等。亮抑蛋白酶肽是由玫瑰鏈霉菌Streptomyces roseus MB-26-AI產(chǎn)生的胰蛋白酶抑制劑，它是許多蛋白酶抑制劑中的一種，它的抑制作用與底物呈競(jìng)爭(zhēng)性抑制。對(duì)血纖維蛋白溶酶的抑制IC50(半抑制濃度)為8μg/mL，但不抑制糜蛋白酶。

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，4℃保存一周，-20℃保存6個(gè)月。

名稱(chēng)：細(xì)胞線粒體純化試劑盒
貨號(hào)：YT043
規(guī)格：50-100次
本試劑盒用于快速便捷分離培養(yǎng)細(xì)胞線粒體，在分離線粒體的同時(shí)可以獲得去除線粒體的細(xì)胞漿蛋白，可用于研究細(xì)胞色素c等線粒體蛋白向胞漿的釋放。

使用本試劑盒分離獲得的線粒體純度較高，并且大部分分離獲得的線粒體都含有完整的內(nèi)膜和外膜，并具有線粒體的生理功能。因此本試劑盒分離得到的線粒體可以用于線粒體的生理功能等方面的研究。例如可以使用百奧萊博的YT148線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-1)測(cè)定分離得到的線粒體的膜電位。

本試劑盒分離得到的線粒體也可以被試劑盒中的線粒體裂解液或其它適當(dāng)裂解液裂解后用于SDS-PAGE、Western、雙向電泳等蛋白分析。

本試劑盒提供了線粒體制備過(guò)程中勻漿程度的重要判斷指標(biāo)，即臺(tái)盼藍(lán)染色，使分離得到的線粒體的質(zhì)量更加有保證。臺(tái)盼藍(lán)染色液為選用試劑，在實(shí)驗(yàn)條件成熟后可以不必使用。

本試劑盒提供了蛋白酶抑制劑PMSF，使勻漿時(shí)蛋白酶的活性被適當(dāng)抑制，這樣在獲得線粒體的同時(shí)還可以獲得有時(shí)有用的去除了大量線粒體的蛋白，在進(jìn)行蛋白或酶活分析時(shí)可以作為對(duì)照。如果每個(gè)樣品的細(xì)胞數(shù)量為2000-5000萬(wàn)，本試劑盒可以處理50-100個(gè)樣品。

試劑盒組份：
線粒體分離試劑———125ml
臺(tái)盼藍(lán)染色液————10ml
線粒體儲(chǔ)存液————15ml
線粒體裂解液————15ml
PMSF(晶體)—————可配制1.5ml 100mM PMSF
PMSF(溶劑)—————1.5ml

注意事項(xiàng)：
1. 試劑盒中的試劑對(duì)于不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟槐厝渴褂谩?br /> 2. 如果不是用于制備線粒體蛋白樣品，線粒體分離試劑和線粒體裂解液中不必加入PMSF。
3. 如果用于制備線粒體蛋白樣品，線粒體分離試劑和線粒體裂解液中需添加PMSF。PMSF一定要在線粒體分離試劑或線粒體裂解液加入到樣品中前2-3分鐘內(nèi)加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。
4. 分離線粒體的所有步驟均需在冰上或4℃進(jìn)行，所用溶液需冰浴或4℃預(yù)冷。
5. 通常在分離線粒體時(shí)前后兩次離心速度選取600g和11,000g，如果希望純度更高，但對(duì)線粒體的得率要求不高，前后兩次離心速度可以采用1000g和3500g。
6. 臺(tái)盼藍(lán)與PMSF對(duì)人體有毒，請(qǐng)注意小心防護(hù)。

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期一年。


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