ALH375 改良Bradford法蛋白定量試

產(chǎn)品簡介
改良Bradford法蛋白定量試的品牌是百奧萊博,是優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品,本制品僅用于生物化學(xué)研究方面,本產(chǎn)品質(zhì)量好,且具價格,深為用戶稱道,了解更多改良Bradford法蛋白定量試等蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示:包括改良Bradford法蛋白定量試劑盒在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:改良Bradford法蛋白定量試劑盒
英文名稱:Protein Quantitation Kit By Bradford
產(chǎn)品貨號:ALH375
產(chǎn)品規(guī)格:1000次|2500次
本試劑盒是在上常用的蛋白濃度檢測方法之一Bradford法基礎(chǔ)上(考馬斯亮藍(lán)結(jié)合顯色法)改進(jìn)而成。當(dāng)Bradford染色液(考馬斯亮藍(lán))和蛋白在酸性條件下結(jié)合時,zuì大吸光值波長立刻由465 nm轉(zhuǎn)移至 595nm,同時顏色由褐色轉(zhuǎn)為藍(lán)色,通過測定吸光值大小并對照標(biāo)準(zhǔn)蛋白的吸光值,推算出蛋白濃度。
試劑盒組份(1000次):
蛋白標(biāo)準(zhǔn)(5mg/ml BSA)—————1ml
Bradford染色液—————————200ml
產(chǎn)品特點(diǎn):
1.靈敏度高,檢測濃度下限達(dá)到25μg/ml,zuì小檢測蛋白量達(dá)到0.5μg,待測樣品體積為1-20μl。
2.檢測速度快,10-20個樣品只需不足10分鐘即可完成。
3.在50-1000μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。
注意事項(xiàng)
1. Bradford 染色液含有刺激性或者腐蝕性化合物,操作時要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時,要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
2. Bradford 染色液中考馬斯亮藍(lán)易聚集成團(tuán),每次使用前請顛倒6~8 次并且豎直抓住瓶口做水平劃圈動作,旋轉(zhuǎn)瓶中液體,幫助充分混勻,但不可以上下振蕩混勻。
3. 低溫會降低Bradford 染色液的敏感度,因此每次使用前應(yīng)該使Bradford 染色液回復(fù)到室溫。僅僅將需要的Bradford 染色液復(fù)溫,可以減少復(fù)溫時間。倒出每次需要的Bradford 染色液回復(fù)到室溫,將原瓶放回冰箱。
4. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)請在全部溶解后先混勻,再稀釋成一系列不同濃度的蛋白標(biāo)準(zhǔn)。標(biāo)準(zhǔn)品曲線配制時,如果吸量不準(zhǔn)確或者加樣槍不會造成標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)減小,可根據(jù)需要使用倍比梯度稀釋的方法來配制,或者使用度高的加樣槍。
5. 由于Bradford 法在蛋白濃度增高到一定時候,顏色反應(yīng)并不成比例增加,因此得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線只是在一定范圍內(nèi)可以近似看成直線,每次應(yīng)按照實(shí)際測得的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出大致的蛋白濃度。
6. 需要酶標(biāo)儀一臺,zuì佳檢測波長為595nm,也可以在570-610nm 之間波長測定,但會降低一些敏感度;并需96 孔板。如果沒有酶標(biāo)儀,也可以使用普通的分光光度計測定,但是測定蛋白濃度時,需根據(jù)測定吸光度的杯子的體積,按比例調(diào)整Bradford 染色液和樣品的體積。使用分光光度計測定蛋白濃度時,每個試劑盒可以測定的樣品數(shù)量可能會顯著減少。
7. Bradford 法測定蛋白濃度不受大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響,樣品中巰基乙醇的濃度可高達(dá)1M,二硫蘇糖醇的濃度可高達(dá)5mM。但受略高濃度的去垢劑影響。需確保SDS 低于0.125%,Triton X-100 低于0.125%,Tween 20 低于0.06%。可以考慮用超純水稀釋,透析/除鹽,ACETONE/TCA 沉淀蛋白后重溶于超純水等方法來消除干擾物質(zhì)的影響。
儲存條件:-20℃,有效期9個月。
本制品別名:改進(jìn)型Bradford法蛋白定量試劑盒|Bradford蛋白濃度測定試劑盒
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名稱:卵白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品(2mg/mL)
貨號:BTN90610
規(guī)格:1mL
本產(chǎn)品是濃度為2mg/mL的卵白蛋白,用做蛋白測定的標(biāo)準(zhǔn)品。
儲存條件:低溫運(yùn)輸和-20℃保存,有效期一年。
名稱:Bradford蛋白定量試劑盒
貨號:WE0275
規(guī)格:800次微孔板(100管次)
Bradford 法是zuì簡單和快速的比色蛋白定量方法。 這一方法基于考馬斯亮藍(lán)G-250與蛋白質(zhì)結(jié)合后, 產(chǎn)生藍(lán)色化合物,反應(yīng)迅速而穩(wěn)定。反應(yīng)化合物在465-595 nm處有zuì大的光吸收值,化合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關(guān)系,因此可通過檢測595 nm的光吸收值的大小來計算蛋白的含量。本產(chǎn)品將傳統(tǒng)的Bradford方法進(jìn)行了改良,zuì大限度的加大蛋白定量的線性范圍,變異性小于普通考馬斯亮藍(lán)染色法,靈敏度范圍為100-1,500μg/ml。使用本產(chǎn)品反應(yīng)迅速,顏色產(chǎn)物1小時內(nèi)保持穩(wěn)定。本試劑盒適用于多種緩沖液系統(tǒng),不受金屬離子、還原劑和螯合劑的干擾。
試劑盒組成:
| 組成 | 規(guī)格 |
| Bradford Protein Assay Reagent | 2×100ml |
| BSA Standard Solution(2mg/ml) | 2ml |
注意事項(xiàng):
1、BSA標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致(可用1×PBS或0.9%生理鹽水進(jìn)行稀釋)。
2、本試劑盒不適合含有去污劑的蛋白定量,具體干擾物質(zhì)(具體見附表1),可采用BCA蛋白定量試劑盒(WE0276)或其他蛋白定量產(chǎn)品。
3、所測蛋白分子量必須大于3 kD。
使用方法:
1、稀釋BSA標(biāo)準(zhǔn)品:用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋BSA標(biāo)準(zhǔn)品。
| 管號 | 稀釋液用量(μl) | BSA標(biāo)準(zhǔn)品用量(μl) | BSA標(biāo)準(zhǔn)品zuì終濃度(μg/ml) |
| A | 0 | 100 | 2000 |
| B | 50 | 150 | 1500 |
| C | 200 | 200 | 1000 |
| D | 200 | 200(從C管中取) | 500 |
| E | 200 | 200(從D管中取) | 250 |
| F | 200 | 200(從E管中取) | 125 |
| G | 200 | 0 | 0(空白) |
2、試管檢測(檢測范圍:100-1500μg/ml)
1)按上表稀釋標(biāo)準(zhǔn)品,將30μl稀釋好的BSA標(biāo)準(zhǔn)品分別加到作好標(biāo)記的試管中。
2)取干凈的試管,分別加入30μl待測蛋白樣品(原液或稀釋液),并作好標(biāo)記,推薦每個測定做2-3個平行反應(yīng)。
3)向步驟1)和步驟2)的試管中各加入1.5ml Bradford Protein Assay Reagent,充分混勻,室溫放置10分鐘。
4)用分光光度計測定595 nm處的吸光值。
5)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算樣品中的蛋白濃度。
注意:數(shù)據(jù)處理時需要去除明顯錯誤的值。未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得, 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。如果是計算機(jī)繪制的曲線,可以從計算機(jī)給出的線性方程式計算出未知樣品的濃度。
6)如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內(nèi),請重新稀釋樣品后再次測定。
3、微孔檢測(檢測范圍:100-1500μg/ml)
1)將按表1稀釋好的A-G BSA標(biāo)準(zhǔn)品和待測蛋白樣品(原液或稀釋液)各5μl分別加到作好標(biāo)記的96孔板微孔中。
2)每孔加入250μl Bradford Protein Assay Reagent,充分混勻,蓋上96孔板蓋,室溫放置10分鐘。
3)用酶標(biāo)儀測定595 nm處的吸光值。
4)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算樣品中的蛋白濃度。
注意:數(shù)據(jù)處理時需要去除明顯錯誤的值。未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得, 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。如果是計算機(jī)繪制的曲線,可以從計算機(jī)給出的線性方程式計算出未知樣品的濃度。
5)如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內(nèi),請重新稀釋樣品后再次測定。
附表1. 干擾物質(zhì)表
| 化合物 |
耐受濃度 |
| 緩沖液 | |
| 乙酸鹽 | 0.6M |
| 甘氨酸 | 0.1M |
| HEPES | 0.1M |
| MES | 0.7M |
| MOPS | 0.2M |
| Na+-檸檬酸 | 50mM |
| PIPES | 500mM |
| 磷酸鈉/磷酸鈉 | 1M |
| 乙酸鈉 | 0.6M |
| Tris | 2M |
| 鹽類 | |
| 硫酸銨 | 1M |
| NaCl | 1M |
| 尿素 | 6M |
| 性化合物 | |
| 甘油 | 99% |
| 還原劑 | |
| β-巰基乙醇 | 1M |
| DTT | 1M |
| 去垢劑和變性劑 | |
| Brij35 | 干擾 |
| 脫氧膽酸納 | 0.25% |
| CHAPS | 1% |
| NP-40 | 干擾 |
| 辛葡糖 | 2% |
| SDS | 0.1% |
| Tween-20 | 干擾 |
| Triton X-100 | 0.1% |
| 糖類 | |
| 蔗糖 | 1mM |
| 螯合劑 | |
| EDTA | 100mM |
| EGTA | 50mM |
| 其他 | |
| HCl | 0.1M |
| NaOH | 0.1M |
| NAD | 1mM |
| 苯 | 5% |
儲存條件:2~8℃

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