QN1156 ECL化學發光法檢測試劑盒
- 產品/服務：QN1156 ECL化學發光法檢測試劑盒
- 型 號：QN1156
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-08-09
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：965
產品簡介
北京百奧萊博供應的ECL化學發光法檢測試劑盒用于生化實驗研究等領域，我公司的ECL化學發光法檢測試劑盒品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括ECL化學發光法檢測試劑盒(山羊IgG)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：ECL化學發光法檢測試劑盒(山羊IgG)
英文名稱：ECL Western Blotting Detection Kit(Goat IgG)
產品貨號：QN1156
產品規格：1盒
本試劑盒主要用于western blotting的化學發光顯色，含有HRP標記抗山羊IgG二抗。
SDS-PAGE電泳后，蛋白質按照分子量大小分離，轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)后，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶標記的第二抗體起反應，加入發光底物后，能讓膠片感光。經顯影和定影后，可以在膠片上顯示出條帶(抗原所在位置)。
試劑盒組分：
封閉試劑———————————30g(可配制400ml)
10倍濃縮抗體稀釋液——————50ml
HRP標記山羊IgG二抗——————0.3ml，效價1:500～1000
ECL顯色液-——————————25mlA+25mlB
常規電泳轉膜后:
1)清洗轉印膜：將膜剝離下后，作好標記，一般在左上角剪一缺口。室溫用TBS-T漂洗3次每次5min,以盡量洗去轉印膜上的SDS，防止影響后面的抗體結合。
2)按5g封閉試劑加100ml雙蒸水計，配制膜封閉液，配好的膜封閉液為乳白色懸液，將漂洗過的轉印膜放入封閉液內，置搖床孵育，室溫封閉30min。用TBS-T緩沖液(PH7.6)洗膜，室溫漂洗3次每次5min。
3)將10×抗體稀釋液用雙蒸水稀釋成1×(10ml,10×抗體稀釋液加入90ml雙蒸水，混勻，可4℃保存三個月)。此稀釋液可作為一抗和二抗的稀釋液。
4)用1×的抗體稀釋液稀釋一抗。根據用量以及一抗的推薦稀釋濃度來稀釋一抗。將雜交膜放入雜交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育過夜或37℃搖動孵育2h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次。
注：如果所加一抗不同，可在此步將膜沿電泳方向剪成條，分別作好標記，分開孵育。
5)用TBS-T緩沖液(PH7.6)洗膜，室溫漂洗3次每次5min。
6)用1×的抗體稀釋液稀釋二抗。根據用量，按10ml抗體稀釋液加入15ul的HRP標記二抗的比例，配制二抗工作液。將雜交膜放入雜交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃搖動孵育1h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次。
7)用TBS-T緩沖液(PH7.6)洗膜，室溫漂洗3次每次10min。
8)根據用量，取ECL發光液A、B等量混勻，加在膜正面，暗室顯色1～5分種。傾去顯色液，小心用紙吸去顯色液，在上面蓋一層平整的透明紙。再取出感光膠片，做好標記，輕輕的放在膜上，顯色30秒到1分鐘，取出膠片浸入顯影液中，觀察顯色情況，再放入定影液中1分鐘。根據條帶強弱，再次感光時可減短或者加長感光時間(從5秒到30分鐘)以期達到理想結果。
注意事項：
1.請根據一抗來源選擇試劑盒。
2.可以根據顯色結果來優化實驗反應時間。如背景過深，可延長膜封閉時間，加長zuì終漂洗次數與時間。如果
條帶過弱，可增加抗體濃度，可延長抗體孵育時間或加長感光時間。
3.TBS-T(0.01M，PH7.6)配制方法：稱取NaCl 8.5g，Tris 1.21g，用800ml的雙蒸水溶解，用鹽酸調PH到7.6，再加入0.5ml Tween-20，用雙蒸水加至1000ml，混勻即可。(也可按照自己的配制習慣來配制)
儲存條件：-20℃避光，有效期一年。
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