一站式RNA電泳套裝由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于科研目的，本品質量穩定，價位合理，需要一站式RNA電泳套裝等核酸電泳和回收產品的客戶，請到我公司官網聯系我們。...

特別提示：包括一站式RNA電泳套裝在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：一站式RNA電泳套裝
英文名稱：One-Stop RNA Electrophoresis Pack
產品貨號：BTN60904
產品規格：10次

本品是包括瓊脂糖、去離子甲醛、RNA上樣液、電泳液等在內的RNA電泳套裝，專門用于RNA電泳分析。可以進行至少10次mini變性膠電泳。

產品特點：
1. 即開即用，用戶不需要自己進行RNase 滅活、高壓滅菌、pH調節等操作。
2.與Northern雜交等后續反應兼容。

產品組成：

成分	規格
瓊脂糖	5g
超純水	250ml
甲醛	60ml
RNAload(含EB)	0.5ml
RNAep，10×	100ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸和保存，但收到貨后RNAload 需要4℃保存，RNAep，10×一旦打開需要-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：所有器皿(三角瓶，電泳槽，槍頭等)均需去除RNase。強烈推薦使用本公司的的固相RNase 清除劑。

一、配制瓊脂糖甲醛變性膠(1.2%，100mL)
1.在三角瓶中加入下列成份：瓊脂糖 1.2-1.5g；DEPC水 87mL
2. 將瓊脂糖加熱融化后，加入10mL 10×RNAep(10×RNAep 就是10×MOPS緩沖液，其瓶子一旦打開，就很容易產生污染細菌，細菌大量繁殖后會釋放大量 RNase，所以剩下的10×RNAep zuì好-20℃放置)。
3. 待膠冷卻至 60℃左右，再加下列成份：甲醛 3.0mL；自備EB(10mg/mL)2-4μL
注意：由于本試劑盒提供的RNAload中含EB，所以也可以不加EB，但效果較差。如果使用自備的其他染料，如SYBR Green I，則不能同時使用其他染料，包括含EB的RNAload，用戶需要另購不含EB的RNAload)。
4. 混勻后倒膠，凝固半小時后即可以使用。

二、配制電泳液
5. 將RNAep 用DEPC 水稀釋十倍后即成電泳液，所需要的體積根據使用的電泳槽決定。

三、變性RNA樣品
6.在一干凈的離心管中將5-10μL RNA和15μL RNAload 混合，50-60℃保溫10分鐘后冰浴5-10分鐘，直接上樣。注意：每一泳道至多可分析30μg RNA，通常用10-20μg 總RNA進行Northern雜交，可以檢測高豐度mRNA(占mRNA 總量的0.1%以上)；如待測RNA含量微，每個泳道需加0.5-3.0μg poly(A)+ RNA。

四、電泳
7.電泳時，將凝膠預電泳5 min(電壓為5 V/cm)。隨后加樣品和分子量對照(如果有的話)，以3－4 V/cm的電壓電泳，直至染料遷移至膠下游的3/4處。
8.電泳結束后，在300nm 紫外燈下拍照。

五、后續處理
9. 按標準方法進行Northern雜交等后續處理。

使用效果：

圖注: 用本產品電泳兔全血總RNA效果圖。10μL 總RNA與15μL RNAload 混合后在甲醛瓊脂糖變性膠上電泳0.5小時，直接在紫外燈下觀察并照相。

疑難解答：
Q：RNA電泳為何zuì好使用RNAep，不要使用DNA電泳液TAE或TBE？
A：一是因為RNAep 經過去RNase處理，而一般實驗室使用的TAE或TBE都沒有經過去RNase處理，故有可能含RNase，使樣品RNA 降解。即使要滅活TAE或TBE中的RNase 也十分麻煩，因為DEPC 不能處理含Tirs的緩沖液；二是TEB含有硼酸，硼酸是研究多羥基醇和糖的經典試劑，它能與RNA中含多羥基的核糖反應生成糖硼酸絡合物，故電泳時RNA 帶型十分彌散。在一定濃度范圍內，RNA分子間還能通過硼酸形成分子間復合物，出現電泳時各種RNA以一條帶的形式出現的現象。所以RNA電泳時要避免使用含硼酸的緩沖液。使用TAE效果雖然比TBE 稍好，但文獻報道(BioTechniques 2000，28:414-415)，它不能分離某些大小不同的RNA分子。
Q：上樣孔里的紅色熒光物一定是污染的基因組DNA 嗎？
A：不是。用TAE或TBE電泳液和非變性膠電泳RNA時容易產生此現象，初步研究發現大部分紅色熒光物是變性不充分的單鏈RNA通過堿基互補或通過硼酸絡合(如果使用TBE作電泳液的話)形成的復合物，加RNase處理后，這些紅色熒光物一般會消失。為避免此現象，建議zuì好使用甲醛變性膠電泳。如果需要使用非變性膠，也必須在上樣前使RNA變性。
使用百奧萊博優化的上樣/變性/染色三用溶液RNAload可以使RNA在非變性膠上電泳時也有較好分辨率。使用非變性膠時，可以使用TAE或超快電泳液SuperBuffer-2，zuì好不要使用TBE緩沖液，因為TBE中的硼酸能與RNA的多羥基形成復合物，RNA 很難形成銳利的條帶。
Q：如何確認和去處除污染的基因組DNA？
A：如果懷疑有DNA污染，可以用RNase處理RNA樣品，然后再電泳。如果上樣孔里的紅色熒光物不消失，則表示是基因組DNA污染。進一步確認可以使用PCR擴增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA去除劑DNAScavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有殘留的RNase污染，所以必須嚴格按照廠家提供的使用手冊進行操作。
Q：為何我的植物RNA樣品有4-5 條帶？
A：部分植物組織有葉綠體等質體，而葉綠體有核糖體，所以也有其rRNA。
葉綠體的rRNA跟細胞漿里面核糖體的rRNA大小不同，所以一般會多出兩條帶(共4 條rRNA 條帶)。小的tRNA和5S rRNA 有時可見，有時不可見，取決于回收效率。

根據您的關注的一站式RNA電泳套裝，您可能還對以下產品有需求：



名稱：一站式DNA尿素-PAGE電泳套裝
貨號：BTN90317
規格：30次
本品是專門用于DNA 尿素-PAGE電泳的一站式試劑盒。

產品特點：
1.一站式，即開即用，用戶不需單獨準備各種成分，十分方便。用戶不需要單獨準備各種成分。
2.可用于DNA 測序、AFLP、DDRT、TGGE和RNase 保護實驗等。
3. 安全，免去了實驗人員接觸粉末狀的劇毒物品丙烯酰胺。
4.電泳后可直接用于銀染、EB染色等實驗。

產品組成：

成分	規格	保存
電泳級尿素	210g	常溫
電泳級丙烯酰胺	77.34g	常溫
電泳級甲叉雙丙烯酰胺	2.67g	常溫
10×TBE電泳液	250ml	常溫
電泳級TEMED	1.5ml	4℃，避光
電泳級過硫酸銨	1g	常溫
2×尿素-PAGE上樣液	1ml	-20℃
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸，保存條件見上表，有效期一年。

使用方法：

一、PAGE濃度和交聯度的選擇指南
尿素-PAGE一般推薦用29：1(丙烯酰胺：甲叉雙丙烯酰胺)的交聯度，
在此條件下，DNA片段和zuì適PAGE濃度對應關系如下：

單鏈DNA長度	zuì佳PAGE濃度	二甲苯青FF遷移率 對應的長度	溴酚藍的遷移率 對應的長度
50-400nt	8%	160nt	45nt
200-1000nt	5%	260nt	65nt
750-2000nt	3.5%	460nt	100nt

二、制備尿素-PAGE膠
1. 配制尿素-PAGE膠(這是配制100mL膠的用量，配制更大體積的膠則需以此用量為基礎按比例增加)
A：新鮮配制10%的APS(過硫酸銨)：按每0.1 克過硫酸銨干粉加1mL超純水的比例將水加到裝有硫酸銨干粉的1.5mL EP 管中，搖晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B：新鮮交聯度為29:1的40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液(AB溶液，下同)：在裝有77.34 g電泳級丙烯酰胺干粉的瓶中加入約120mL自備的去離子水，然后將全部甲叉雙丙烯酰胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低，不會溶解在這少量溶液中)。充分搖晃混勻后所得溶液即40%的AB溶液。配制40%而非30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
C：配尿素-PAGE膠：在一個250mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去離子水、40%AB溶液和10×TBE緩沖液。丙烯酰胺單體溶液具有神經毒性，一定要戴手套操作。

PAGE膠濃度	各成分用量(尿素為克，其余單位是mL)			補水到(mL)
	尿素	40%AB溶液	10×TBE緩沖液
5%	42	12.5	5.0	100
6%	42	15.0	5.0	100
7%	42	17.5	5.0	100
8%	42	20.0	5.0	100
9%	42	22.5	5.0	100
10%	42	25.0	5.0	100
11%	42	27.5	5.0	100
12%	42	30.0	5.0	100

D：攪拌溶解，然后用濾紙過濾。zuì好能抽真空10-15分鐘以去除溶液中的氧氣(氧氣能抑制丙烯酰胺聚合反應)，無條件也可以不脫氧。
E：加入500μL 10%APS和100μL TEMED，迅速搖勻后倒膠。
F:在膠的液面距離達到頂部時停止灌膠，插入梳子。
G:室溫聚合30-60分鐘(低溫抑制聚合反應)。
H: 拔出梳子，用0.5×TEB液沖洗加樣孔。

三、樣品準備
2. 對一般樣品、測序樣品、微衛星DNA、AFLP樣品、DDRT樣品、RPA樣品：將樣品跟上樣液1:1 混合，95℃ 3分鐘變性，然后放冰上待用。
3. 對TGGE樣品：可以直接上樣。

四：電泳
4. 將凝膠板固定在電泳裝置上，往上槽和下槽中加入足夠0.5×TEB電泳液。
5.預電泳5-30分鐘將冰上放置的樣品上樣。
6.連接電源線，打開電源開關。根據膠的大小選擇功率(固定功率可以固定產熱，這樣不容易發生過熱而使膠板破裂的現象。如果固定電流或電壓，產熱都將隨電泳時間而變化，不好控制)。對小膠一般用5-6W 固定功率，大膠用15-25W 固定功率。
7. 終止電泳，取出凝膠進行后續的處理(如銀染)。注意：如果銀染，必須延長固定時間以便讓洗出尿素，否則殘留尿素會干擾后面的銀染。

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貨號	名稱	規格
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RFT012	15kb plus DNA ladder(250～15000bp)	100T(2×250μl)
RFT013	2kb DNA ladder(100～2000bp)	100T(2×250μl)
SY0249	溴化乙錠	1g

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