SV0286 BtsIMutI限制性內切酶
- 產品/服務：SV0286 BtsIMutI限制性內切酶
- 型 號：SV0286
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-05
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：1029
產品簡介
北京百奧萊博供應的BtsIMutI限制性內切酶用于生化實驗研究等領域，BtsIMutI限制性內切酶是我司眾多優質工具酶之一，質量堪比同類進口產品，價格非常優惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括BtsIMutI限制性內切酶在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：BtsIMutI限制性內切酶
英文名稱：BtsIMutI Restriction Endonuclease
產品貨號：SV0286
產品規格：100U
在不同反應緩沖液的活性
BalbBuffer 1.1:
BalbBuffer 2.1: 50%
BalbBuffer 3.1: 10%
CutSmart Buffer:
特性
CutSmart、重組酶。
反應條件
CutSmart 緩沖液，55℃。
熱失活:80℃ 20 分鐘。
濃度
1,000units/ml。
37℃ 時活性
50%。
甲基化敏感性
對 dam、dcm 和哺乳動物 CpG 甲基化均不敏感。
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名稱：T4 DNA連接酶
貨號：WE0239
規格：100U|500U
T4 DNA Ligase 是從表達T4 DNA Ligase 基因的大腸桿菌經誘導表達后分離純化而來的，催化相鄰DNA鏈的5’磷酸基團和3’羥基基團以磷酸二酯鍵結合反應。該酶可催化平末端或粘性末端DNA之間的連接，還可修復雙鏈DNA、RNA、DNA/RNA雜交雙鏈中的單鏈切口。本品可應用于DNA插入片段和載體DNA的粘性末端和平末端的連接，以及線性DNA的自身環化。
產品組成：
| 組份 | 100U | 500U |
| T4 DNA Ligase，5 U/μl | 20μl | 100μl |
| 10×Ligation Buffer | 150μl | 750μl |
| 50%PEG Solution | 150μl | 750μl |
實驗前準備及重要注意事項
1、T4 DNA Ligase的zuì終用量不要超過推薦的用量，否則影響連接效率。
2、PEG可以大提高平末端的連接效率，我們推薦加入終濃度為5% PEG Solution以提高平末端的連接效率。
3、為了提高轉化效率，建議所加入連接產物的量不要超過感受態細胞體積的10%。
4、由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比較粘稠容易掛壁，建議使用之前短暫離心將液體收集到管底，取樣時槍頭盡量不要深入液面太深以免粘在槍頭上造成損失。
使用方法：
一、粘性末端的連接：
1、按以下體系配制反應液：
| 組份 | 20μl體系 | 終濃度 |
| 線性載體DNA | Xμl | 20-100ng |
| 插入DNA片段 | Yμl | 插入片段：載體1:1-5:1 |
| 10×Ligation Buffer | 2μl | |
| T4 DNA Ligase，5 U/μl | 0.2μl | 1 U |
| ddH2O | 補充至20μl |
2、渦旋震蕩，瞬間離心，將管壁上的溶液收集到管底。
3、反應條件：22℃孵育10分鐘。
4、瞬間離心，將管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分鐘或70℃孵育5分鐘以滅活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl連接產物熱擊轉化50μl感受態細胞或取1-2μl連接產物電擊轉化50μl感受態細胞。
注意：如需電擊轉化，推薦用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后進行電擊轉化。
二、平末端的連接：
1．反應體系：
| 組分 | 20μl體系 | 終濃度 |
| 線性載體DNA | Xμl | 20-100ng |
| 插入DNA片段 | Yμl | 插入片段：載體1:1-5:1 |
| 10×Ligation Buffer | 2μl | |
| T4 DNA Ligase，5 U/μl | 1μl | 5 U |
| 50%PEG Solution | 2μl | 5% |
| ddH2O | 補充至20μl | 20μl |
2、渦旋震蕩，瞬間離心，將管壁上的溶液收集到管底。
3、反應條件：22℃孵育1小時。
4、瞬間離心，將管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分鐘或70℃孵育5分鐘以滅活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl連接產物熱擊轉化50μl感受態細胞或取1-2μl連接產物電擊轉化50μl感受態細胞。
注意：如需電擊轉化，推薦用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后進行電擊轉化。
三、線性DNA的自身環化：
1、反應體系：
| 組分 | 50μl體系 | 終濃度 |
| 線性載體DNA | Xμl | 5-50ng |
| 10×Ligation Buffer | 5μl | |
| T4 DNA Ligase，5 U/μl | 1μl | 5 U |
| ddH2O | 補充至50μl | 50μl |
2、渦旋震蕩，瞬間離心，將管壁上的溶液收集到管底。
3、反應條件：粘性末端22℃孵育10分鐘；平末端22℃孵育1小時。
4、瞬間離心，將管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分鐘或70℃孵育5分鐘以滅活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl連接產物熱擊轉化50μl感受態細胞或取1-2μl連接產物電擊轉化50μl感受態細胞。
注意：如需電擊轉化，推薦用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后進行電擊轉化。
儲存條件：-20℃。
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