YT619 SDS-PAGE電泳液

產(chǎn)品簡介
SDS-PAGE電泳液由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持,本品用于科研試驗,本品質(zhì)量穩(wěn)定,價位合理,需要SDS-PAGE電泳液等蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品的客戶,請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示:包括SDS-PAGE電泳液在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:SDS-PAGE電泳液
英文名稱:SDS-PAGE Electrophoresis Buffer
產(chǎn)品貨號:YT619
產(chǎn)品規(guī)格:1L|10×1L
本品可以用于SDS-PAGE時的電泳緩沖液。使用時每個包裝加蒸餾水溶解,定容到一升即可使用。本電泳緩沖液可以回收,回收后可以再使用1-2次。
注意事項:
1. 配制好的電泳液使用時間不宜超過兩周。
2. 回收的電泳液可以重復(fù)使用,但為了取得zuì佳的電泳效果,應(yīng)使用沒有使用過的電泳液。
儲存條件:室溫,有效期2年。
根據(jù)您的關(guān)注的SDS-PAGE電泳液,您可能還對以下產(chǎn)品有需求:
名稱:中等RIPA裂解液
貨號:BTN131007
規(guī)格:250mL
RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等實驗。本產(chǎn)品裂解強度較強,對膜蛋白、胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白和各種轉(zhuǎn)錄因子均有很好的效果,本產(chǎn)品含有各種蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制劑,能有效防止各種蛋白酶對目的蛋白的降解。我公司各種RIPA裂解液產(chǎn)品特點見下表:
產(chǎn)品名稱 | RIPA裂解液(強) | RIPA裂解液(中) | RIPA裂解液(弱) |
有效裂解成分 | 1% Triton X-100,1% deoxycholate,0.1% SDS | 1% NP-40,0.5% deoxycholate,0.1% SDS | 1% NP-40,0.25% deoxycholate |
裂解強度 | 強 | 中 | 溫和 |
對膜蛋白的提取 | 很好 | 較好 | 一般 |
對胞漿蛋白的提取 | 很好 | 很好 | 很好 |
對核蛋白的提取 | 很好 | 較好 | 較好 |
胞漿磷酸化蛋白提取 | 很好 | 很好 | 很好 |
細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子提取 | 很好 | 很好 | 很好 |
含蛋白酶抑制劑 | 是 | 是 | 是 |
含磷酸酯酶抑制劑 | 是 | 是 | 是 |
主要用途 | WB,IP | WB,IP | WB,IP,co-IP |
儲存條件:低溫運輸,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品:
1. 融解RIPA裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的zuì終濃度為1mM。
2. 裂解細(xì)胞
2.1 對于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后,細(xì)胞就會被裂解。
2.2 對于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管,然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g離心3~5分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意:通常6孔板每孔細(xì)胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升。
對于組織樣品:
1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的zuì終濃度為1mM。
3. 按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g離心3~5分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
注意:RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物,屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗;如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,例如NF-kappaB、p53等時,通常不必進行超聲處理,就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。
備注:
1.為取得zuì佳的使用效果,盡量避免過多的反復(fù)凍融。可以適當(dāng)分裝后使用。
2.裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。
3.用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品,建議使用BCA蛋白濃度測定試劑盒,不建議使用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
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