Babuddy超保真DNA聚合酶是高品質(zhì)的核酸擴增(PCR)產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品僅用于生物化學(xué)研究方面，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多Babuddy超保真DNA聚合酶等核酸擴增(PCR)產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括Babuddy超保真DNA聚合酶在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：Babuddy超保真DNA聚合酶
英文名稱：Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase
產(chǎn)品貨號：WE0109
產(chǎn)品規(guī)格：100U

  Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase是一種快速、高擴增效率的高保真DNA聚合酶，具有5"-3"DNA聚合酶活性和3"-5"外切核酸酶活性。經(jīng)過改造的Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase，其活性區(qū)域融合有一段聚合增強結(jié)構(gòu)域，獨特的結(jié)構(gòu)大提升了保真性和延伸速度。Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase的保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍，是普通Pfu的6倍。其延伸速率為15-30 sec/kb，成功克服了普通Pfu酶擴增效率低、擴增速度慢的缺陷，大大縮短了反應(yīng)時間。本品特別適合于在基因克隆實驗中擴增長片段DNA，尤其在擴增>10 kb的DNA片段時，更加明顯，所擴增的片段zuì長可達20kb。

  本產(chǎn)品中包含兩種PCR緩沖液，經(jīng)過優(yōu)化的緩沖體系使酶的應(yīng)用更加廣泛，即使以復(fù)雜的基因組DNA為模板，也可以保證很高的特異性和長片段的擴增。特有的PCR增強劑DMSO使GC含量高，有二級結(jié)構(gòu)和重復(fù)序列的復(fù)雜模板也能得到擴增。

  使用本產(chǎn)品擴增得到的PCR產(chǎn)物的3"端不帶有“A”堿基，可直接克隆于平末端載體中。如需進行T/A克隆，需在PCR產(chǎn)物末端添加“A”后進行克隆。本產(chǎn)品具有延伸速度快、擴增效率高、保真性強的特點。適用于基因克隆、基因定點突變、SNP等實驗。

產(chǎn)品特點
1、高保真性：保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍，普通Pfu的6倍。
2、擴增速度快：其延伸速率為15-30sec/kb，成功克服了普通Pfu酶擴增效率低、擴增速度慢的缺陷。
3、特別適合于擴增長片段：擴增的片段長度可長達20kb。

產(chǎn)品組成：

組份	20μl×250次(100 U)
Babuddy DNA Polymerase，2U/μl	50μl
5×Babuddy HF Buffer	1.5ml
5×Babuddy GC Buffer	1.5ml
DMSO	0.5ml
50 mM MgCl2	1.5ml

注意：本產(chǎn)品的5×Babuddy HF 和GC Buffer中含有7.5 mM鎂離子。

活性定義：
在74℃，30分鐘內(nèi)，將10 nmol脫氧核苷酸摻入到酸性不溶物質(zhì)所需的酶量定義為1個活性單位(U)。

質(zhì)量控制：
1、核酸內(nèi)切酶活性檢測：50μl反應(yīng)體系中，10 U本酶與0.2 mM dNTPs和1μg的pUC19質(zhì)粒于37℃溫育4小時，<10%的pUC19質(zhì)粒由超螺旋變?yōu)槿笨虪顟B(tài)。
2、7.5 kb基因組DNA PCR擴增：50μl反應(yīng)體系，1×Babuddy HF Buffer，50ng基因組DNA，1 U Babuddy DNA聚合酶，200μM dNTPs和1μM引物，30個循環(huán)PCR擴增出7.5 kb目的片段。
3、20 kb λDNA PCR擴增：50μl反應(yīng)體系，5×Babuddy HF Buffer，10ng λDNA，1 UBabuddy DNA聚合酶，200μM dNTPs和1μM引物，22個循環(huán)PCR擴增出20 kb目的片段。

使用方法：
以下舉例為常規(guī)PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，實際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進行相應(yīng)的改進和優(yōu)化。

1、PCR反應(yīng)體系

試劑	20μl反應(yīng)體系	50μl反應(yīng)體系	終濃度
5×Babuddy HF Buffer	4μl	10μl	1×
dNTP Mix，2.5 mM each	1.6μl	4μl	200μM each
Forward Primer，10μM	1μl	2.5μl	0.5μM
Reverse Primer，10μM	1μl	2.5μl	0.5μM
Template DNA	適量	適量	<250ng
DMSO	0.6μl	1.5μl	3%
Babuddy DNA Polymerase	0.2 μl	0.5μl	1 U/50μl
ddH2O	up to 20μl	up to 50μl

注意：
1)對于復(fù)雜模板或高GC含量的模板，請使用5×Babuddy GC Buffer。
2)可選步驟：對于復(fù)雜模板，如高GC含量、帶有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的序列，可加入本產(chǎn)品中提供的DMSO或其他PCR添加物，以提高擴增效率，推薦終濃度為3%，也可按照2%的濃度遞增優(yōu)化。由于DMSO可以降低引物的Tm值，因此若DMSO使用濃度很高，需降低退火溫度。

a.模板：在50μl PCR反應(yīng)體系中，DNA模板的建議用量為低復(fù)雜度模板(如質(zhì)粒DNA，λDNA等)1 pg- 10ng，高復(fù)雜模板(如基因組DNA)50-250ng。
b.引物：引物濃度請以終濃度0.2-1.0μM作為設(shè)定范圍的參考，推薦終濃度為0.5μM。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。
c.鎂離子：鎂離子濃度請以終濃度1.5-3 mM作為設(shè)定范圍的參考。本產(chǎn)品的 5×Babuddy HF Buffer和GC Buffer中已經(jīng)含有7.5 mM鎂離子，可根據(jù)dNTP濃度、引物和模板來調(diào)整，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。若引物或模板中有螯合劑(如EDTA)存在，則應(yīng)提高鎂離子濃度。若需要對鎂離子濃度進行優(yōu)化時，可使用本產(chǎn)品中提供的MgCl2按照0.5 mM濃度梯度逐步調(diào)整。
d.dNTPs：反應(yīng)體系中dNTPs的濃度一般為每種200μM，使用本品時，不推薦使用dUTP和帶有尿嘧啶的引物或模板。
e.Babuddy酶的濃度：Babuddy酶推薦的使用濃度為1 U/50μl 反應(yīng)體系，可在0.5-2 U/50μl 反應(yīng)體系之間優(yōu)化酶的濃度。

2、PCR反應(yīng)條件
常規(guī)三步法PCR反應(yīng)：

步驟	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	98℃	30 s-3 min
變性	98℃	5-10 s	25-35 個循環(huán)
退火	45-72℃	10-30 s
延伸	72℃	2-4 kb/min
終延伸	72℃	5-10 min

a．變性：簡單模板的預(yù)變性溫度為98℃，預(yù)變性時間為30 s。對于比較復(fù)雜的模板，預(yù)變性時間可延長至3分鐘。
b．退火：使用本產(chǎn)品時，退火溫度設(shè)定的基本原則是，當(dāng)引物長度小于或等于20 nt時，退火溫度為引物zuì低的Tm；當(dāng)引物長度大于20 nt時，退火溫度應(yīng)在zuì低Tm的基礎(chǔ)上以Tm+3℃退火10-30 s。當(dāng)無法得到理想的擴增效率時，應(yīng)以zuì低的Tm值逐步提升至模板延伸溫度。對于Tm高的引物可以使用兩步法PCR。
c．延伸：延伸時間應(yīng)根據(jù)所擴增片段的長度和模板復(fù)雜程度設(shè)定，本產(chǎn)品中所包含的Babuddy DNA Polymerase擴增效率為2-4 kb/min，復(fù)雜性低的模板可用4 kb/min，復(fù)雜性高的基因組DNA模板，延伸時間則應(yīng)為2 kb/min，對于一些cDNA模板，延伸時間可增加到1.5 kb/min。
d．循環(huán)次數(shù)：可根據(jù)擴增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，錯配機率會增加，非特異性背景嚴重。所以，在保證產(chǎn)物得率的前提下，應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)。

當(dāng)引物的退火溫度較高時，建議使用兩步法進行PCR擴增：

步驟	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	98℃	30 s-3 min
變性	98℃	5-10 s	25-35 個循環(huán)
延伸	72℃	2-4 kb/min
終延伸	72℃	5-10 min

儲存條件：-20℃，避免反復(fù)凍融。

根據(jù)您的關(guān)注的Babuddy超保真DNA聚合酶，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：

貨號	名稱	規(guī)格
BTN70909	PCR級綠如藍DNA染料	0.1mL
YT381	PCR試劑盒(含YT Taq酶，Buffer，dNTP，上樣液)	400次
WE0102	2×Taq MasterMix(含染料)	1ml|5ml|25ml
WE0117	BalbMulti多重PCR Mix	1ml|5ml
WE0138	一步法Real-Time RT-qPCR試劑盒(低含量ROX校正染料)	100次
WE0158	miRNA熒光定量檢測試劑盒	125次

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RFT106 隨機六聚體引物 100μl
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SY0048 dNTP混合溶液(25 mM each) 250μL
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JN0024 熱啟動Taq Plus DNA聚合酶 250U

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