SY0372 8%預(yù)制膠,12孔

北京百奧萊博供應(yīng)的8%預(yù)制膠,12孔用于科研試驗(yàn),我公司專注于蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng),為您提供的8%預(yù)制膠,12孔質(zhì)量可靠,批間差小,且價(jià)格公道,熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...
特別提示:包括8%預(yù)制膠,12孔在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:8%預(yù)制膠,12孔
英文名稱:Precast Protein Gels, 8%, 12 wells
產(chǎn)品貨號(hào):SY0372
產(chǎn)品規(guī)格:1盒(10塊)
本品通過pH中性緩沖液制備,丙烯酰胺與甲叉丙烯酰胺配比是29:1,其規(guī)格為濃縮膠5%,分離膠8%,膠板尺寸10×8cm,凝膠厚度1 mm,12孔梳齒,單孔zuì大上樣量30 μl。電泳及轉(zhuǎn)膜緩沖液使用傳統(tǒng)的tris-glycine緩沖液,蛋白條帶直且尖銳。本品兼容Biorad,天能及北京六一的mini膠電泳槽及其他任何膠板寬度在10 cm的電泳槽。
N,N-亞甲基雙丙烯酰胺(甲叉丙烯酰胺)交聯(lián)劑的濃度不同從而分離不同大小范圍的蛋白質(zhì)。與傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室自行配制凝膠相比,使用預(yù)制膠具有以下優(yōu)點(diǎn):1)即開即用,不用再配制N種溶液、灌膠、等膠凝固,節(jié)省了寶貴的時(shí)間和精力;2)不用接觸幾種具有積累性神經(jīng)毒性的試劑(丙烯酰胺/甲叉丙烯酰胺:神經(jīng)毒性和遺傳毒性;TEMED:強(qiáng)神經(jīng)毒;過硫酸銨:可嚴(yán)重?fù)p傷呼吸道,眼睛,皮膚);3)大規(guī)模生產(chǎn),膠與膠之間重復(fù)性好,質(zhì)量穩(wěn)定,不像手工灌膠那樣結(jié)果差異大。
使用方法
1)剪開包裝取出膠,撕去膠板底端膠紙,將預(yù)制膠固定在電泳槽中,加入電泳緩沖液沒過梳齒部位,雙手按住梳子左右部位將其平穩(wěn)緩慢(一定要慢,否則會(huì)將膠齒拔斷或拔歪)拔出,在前后板的上方中央卡上一個(gè)“V”型卡(通過加固前后板,不僅可防止槍頭上樣用力過猛撬開兩板產(chǎn)生縫隙,還可穩(wěn)定跑膠質(zhì)量,電泳過程中“V”型卡不可取出),上樣后進(jìn)行電泳,電泳后取出膠板,用鑷子或小螺絲刀沿左右兩板間的縫隙將兩板別開,將膠取出,棄去塑料板。
2)電泳:使用《分子克隆》的 tris-glycine電泳緩沖液(tris 25 mM, glycine 250 mM, SDS 0.1%)。推薦使用低壓100V,15min換高壓150V跑至電泳結(jié)束。
3)轉(zhuǎn)膜:使用《分子克隆》的 tris-glycine 電轉(zhuǎn)緩沖液(含 20%甲醇或乙醇),操作與實(shí)驗(yàn)室原有操作完全相同。
注意事項(xiàng)
1)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2)本品含有的部分試劑如丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺有毒,對(duì)人體有害,請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。
3)電泳及電轉(zhuǎn)緩沖液建議使用新配制的緩沖液,試劑純度不夠,反復(fù)使用或長期放置過的緩沖液會(huì)降低電泳效果。傳統(tǒng)《分子克隆》的tris-glycine 電泳及電轉(zhuǎn)緩沖液是不用 NaOH 和 HCl 調(diào)整 pH ,因?yàn)橐氲拟c離子和氯離子會(huì)影響電泳效果。
4)電泳前請(qǐng)務(wù)必撕去膠板底端的膠紙,否則電路不通,無法電泳。
5)拔梳子時(shí)zuì好浸沒在電泳緩沖液中拔,一方面由于液體潤滑梳子更容易拔,另一方面不會(huì)產(chǎn)生氣泡。另外拔梳子時(shí)越慢越好,如此可防止梳齒被拔斷或拔歪。
6)在電泳后開板取膠時(shí),用小號(hào)一字螺絲刀或中號(hào)鑷子插入左右兩板間縫隙,用力搬動(dòng),兩板即可應(yīng)聲分開,此時(shí)兩板底部還不能分開,要通過掰開兩板取出凝膠。
7)在上樣前,使用“V”型卡加固前后板(加樣和電泳過程“V”型卡不可移動(dòng)或拔出),使用時(shí)只需將一個(gè)“V”型卡“輕輕地”(不必卡到底,不掉即可)卡在前后板的上端中間區(qū)域,可確保上樣不會(huì)產(chǎn)生板膠間的縫隙從而導(dǎo)致樣品泄露,電泳時(shí)“V”型卡不必取出如此可有助于穩(wěn)定跑膠質(zhì)量。
8) 本預(yù)制膠對(duì)于Biorad和天能的電泳內(nèi)外槽存在微小泄露,可通過兩種方式解決本問題:一是內(nèi)槽加滿緩沖液,外槽液面加至距內(nèi)槽液面3-5mm,從而可防止在電泳過程中內(nèi)槽液面逐步下降。另一種解決方式是將Biorad的硅膠封閉墊取出后反過來安裝,使其沒有凸起的平滑面朝外,從而防止漏液。
儲(chǔ)存條件:4℃,有效期一年。
根據(jù)您的關(guān)注的8%預(yù)制膠,12孔,您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求:
BTN130542 水蛭素溶液(2萬ATU/mL) 0.1mL
BTN81212C 一站式蛋白質(zhì)非變性PAGE電泳套裝(低pH) 30次
YT039 SDS裂解液 100ml
WE0322 IHC復(fù)染試劑(改良型蘇木素) 10ml
SNM390 蛋白磷酸酶抑制劑混合物(100×) 1ml
SNM478 BCIP/NBT顯色試劑盒 1
KFS070 10×WB洗滌液(TBS) 100ml
KFS220 Caspase-6蛋白檢測(cè)試劑盒 50T
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關(guān)注8%預(yù)制膠,12孔,的同時(shí),為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品:
名稱:SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
貨號(hào):YT047
規(guī)格:可制30-50塊膠
本試劑盒提供了配制SDS-PAGE凝膠所需的各種試劑,用戶只需自備制膠器具和蒸餾水,即可配制PAGE膠(即聚丙烯酰胺凝膠)。SDS-PAGE凝膠配制試劑盒不僅可用于配制SDS-PAGE凝膠,也可用于配制非變性(native)PAGE凝膠。本試劑盒約可配制30-50塊常規(guī)大小的PAGE膠。
產(chǎn)品組份:
30% Acr-Bis (29:1)————100ml
1M Tris-HCl, pH8.8————100ml
10% SDS——————————5ml
過硫酸銨—————————0.5g
TEMED——————————0.5ml
1M Tris-HCl, pH6.8————15ml
注意事項(xiàng):
1. 過硫酸銨配制成10%溶液后,應(yīng)當(dāng)-20℃保存。同時(shí)應(yīng)盡量減少室溫存放時(shí)間,以防失效。
2. TEMED易揮發(fā),使用后請(qǐng)蓋緊瓶蓋。另外凝膠凝聚的速度和溫度及光照關(guān)系密切,可通過適當(dāng)調(diào)節(jié)TEMED的用量,控制在不同的室內(nèi)環(huán)境下凝膠凝聚的速度。
3. TEMED易燃,有腐蝕性,請(qǐng)注意防護(hù)。
儲(chǔ)存條件:4℃,有效期6個(gè)月。
名稱:考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒(常規(guī)法)
貨號(hào):YT056
規(guī)格:1盒
本品采用了zuì經(jīng)典的考馬斯亮藍(lán)染色和脫色方法,以考馬斯亮藍(lán)R250為染料,可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白電泳凝膠的常規(guī)染色和脫色,或Western轉(zhuǎn)膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測(cè)。
使用本試劑盒,采用常規(guī)染色脫色方法累計(jì)時(shí)間達(dá)到2-3小時(shí)后可以觀察到蛋白條帶;采用快速染色脫色方法20分鐘左右即可觀察到蛋白條帶。觀察到zuì清晰的蛋白條帶則需染色脫色更長時(shí)間。本試劑盒中的染色液和脫色液經(jīng)過改良,不含有毒的甲醇,但含有刺激性氣味的乙酸。
試劑盒組分:
考馬斯亮藍(lán)染色液————————100ml
考馬斯亮藍(lán)染色脫色液——————500ml
儲(chǔ)存條件:室溫,有效期一年。
名稱:RIPA裂解液(強(qiáng))
貨號(hào):WE0258
規(guī)格:100ml
RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的組織以及細(xì)胞快速裂解液,主要用于從動(dòng)物組織和哺乳動(dòng)物細(xì)胞中抽取可溶性蛋白,可用于裂解貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。按照其裂解液的強(qiáng)度可以分為強(qiáng)、中、弱三類,具體特點(diǎn)和差異請(qǐng)參考附表2,可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇相應(yīng)產(chǎn)品。RIPA裂解液(強(qiáng))可以有效提取細(xì)胞核、細(xì)胞膜和胞漿蛋白,提取的蛋白可應(yīng)用于蛋白定量、Western Blot、IP等檢測(cè)分析。
RIPA裂解液(強(qiáng))的主要成分為50mM Tris(pH 7.4),150mM NaCl,1%Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS以及sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等。
注意事項(xiàng):
1、為防止蛋白降解,所有的操作盡量在冰上進(jìn)行。
2、使用RIPA裂解液得到的蛋白樣品,可采用BCA法進(jìn)行蛋白定量,以測(cè)定蛋白濃度。產(chǎn)品可單獨(dú)向本公司訂購,如:WE0276 BCA蛋白定量試劑盒。本品含有高濃度的去垢劑,不能用Bradford法進(jìn)行蛋白定量。
3、建議在使用RIPA裂解液前,向溶液中加入蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,以防止蛋白降解,或保持蛋白的磷酸化狀態(tài)。產(chǎn)品可單獨(dú)向本公司訂購,如:WE0259 蛋白酶抑制劑混合物,WE0256 磷酸酶抑制劑混合物。
4、若需獲得更高濃度的蛋白,應(yīng)減少哺乳動(dòng)物蛋白抽提試劑的使用量。
5、對(duì)于培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞,推薦先使用常規(guī)方法消化細(xì)胞,再參考懸浮細(xì)胞蛋白提取步驟操作。
6、對(duì)于離心獲得的細(xì)胞,若不確定細(xì)胞體積,可根據(jù)細(xì)胞數(shù)量計(jì)算RIPA裂解液的使用量。如5×106個(gè)Hela細(xì)胞約需加入500μl RIPA裂解液,以此類推。
使用方法:
一、細(xì)胞樣品
貼壁細(xì)胞蛋白抽提
1、小心傾去貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液。
2、可選步驟:若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的物質(zhì),請(qǐng)先使用預(yù)冷的PBS漂洗細(xì)胞。
3.加入適量RIPA Lysis Buffer(Strong)(使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑),試劑使用量請(qǐng)參考附表1,在冰上用槍頭吹打貼壁細(xì)胞。
表1 貼壁細(xì)胞RIPA 裂解液使用量推薦表
| 細(xì)胞培養(yǎng)板類型或培養(yǎng)面積 | RIPA 裂解液使用量 |
| 100 mm | 500-1000μl |
| 60 mm | 250-500μl |
| 6孔培養(yǎng)板 | 200-400μl /孔 |
| 24孔培養(yǎng)板 | 100-200μl /孔 |
| 96孔培養(yǎng)板 | 50-100μl /孔 |
4、將裂解液轉(zhuǎn)移至新的離心管中,冰上孵育20分鐘,使細(xì)胞充分裂解。
5、14000×g離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中,進(jìn)行下一步分析。
懸浮細(xì)胞蛋白提取
1、懸浮細(xì)胞,2,500×g離心5分鐘,棄去上清。
2、可選步驟:若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的物質(zhì),請(qǐng)使用PBS漂洗細(xì)胞。漂洗后的細(xì)胞懸浮液2,500×g離心5分鐘,棄去上清。
3、加入適量RIPA Lysis Buffer(Strong)(使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑),每5×106細(xì)胞加入約200-500μl RIPA Lysis Buffer(Strong),吹打均勻。
4、冰上放置20分鐘,使細(xì)胞充分裂解。
5、14000×g離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中,進(jìn)行下一步分析。
二、組織樣品
1、取適當(dāng)?shù)腞IPA Lysis Buffer(Strong),在使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑。
2、稱量實(shí)驗(yàn)組織的重量,按照1:10(g/ml)的比例加入RIPA Lysis Buffer(Strong)后將組織剪成細(xì)小碎片,用電動(dòng)勻漿器勻漿處理。若需要濃縮的蛋白提取物,可適當(dāng)減少組織蛋白抽提試劑使用量。
3、冰上孵育20分鐘,使細(xì)胞充分裂解。
4、14000×g 離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中,進(jìn)行下一步分析。
注:RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中可能會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為基因組。
表2 蛋白裂解液性能、參數(shù)比較
| 目錄號(hào) | WE0258 | WE0257 | ||
| 名稱 | RIPA裂解液(強(qiáng)) | RIPA裂解液(中) | RIPA裂解液(弱) | SDS裂解液 |
| 裂解強(qiáng)度 | 強(qiáng) | 中 | 溫和 | 強(qiáng) |
| 有效裂解成分 |
1%Triton X-100, 1%脫氧膽酸鈉, 0.1% SDS |
1% NP-40, 0.5%脫氧膽酸鈉 , 0.1% SDS |
1% NP-40, 0.25%脫氧膽酸鈉 | 1%SDS |
| 膜蛋白提取 | 很好 | 較好 | 一般 | 很好 |
| 胞漿蛋白提取 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 |
| 核蛋白提取 | 很好 | 較好 | 較好 | 很好 |
| 主要用途 | WB,IP | WB,IP | WB,IP,CO-IP | WB,CHIP |
儲(chǔ)存條件:2~8℃
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