SNM376 Tris-Tricine陽緩沖

產品簡介
Tris-Tricine陽緩沖由專業試劑供應商北京百奧萊博提供,用于科學研究,我公司的Tris-Tricine陽緩沖品質上佳,經過多年的開發生產,已然非常成熟,歡迎廣大新老客戶訂購。...
產品詳細介紹
特別提示:包括Tris-Tricine陽緩沖液(1×,pH8.9)在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱:Tris-Tricine陽緩沖液(1×,pH8.9)
英文名稱:Tris-Tricine anode buffer (1 ×, pH8.9)
產品貨號:SNM376
產品規格:500ml
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名稱:抗體稀釋液
貨號:SNM481
規格:100ml
名稱:10×CAPS電轉移緩沖液(不含甘氨酸,適合大分子量蛋白轉移)
貨號:KFS094
規格:500ml
本產品作為蛋白電泳完畢后,將凝膠上蛋白電轉移到PVDF 膜或其它膜上的緩沖液,pH11,含CAPS,不含有甘氨酸,本電泳緩沖液適合大分子量蛋白電轉移。
使用時按10×電轉移緩沖液:甲醇:蒸餾水=1:1:8 的比例配制成1×的工作液,就可以用于電轉移實驗。
儲存:RT,有效期一年。
名稱:5×非變性蛋白上樣緩沖液
貨號:SY0350
規格:2ml
本品用于常規的非變性聚丙烯酰胺(PAGE)蛋白電泳樣品上樣。5×非變性蛋白上樣緩沖液(Non-denatured Gel Sample Loading Buffer)是一種經過改良的以溴酚藍為染料,5倍濃縮的蛋白上樣緩沖液。產品中不含有SDS等變性試劑,但是含有還原性試劑DTT。
注意事項
1)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2)5×非變性蛋白上樣緩沖液中含少量DTT,有輕微刺激性氣味,但不含劇毒的巰基乙醇。
操作方法
1.在室溫或不超過37℃的水浴中溶解5×非變性蛋白上樣緩沖液。水浴溶解后立即室溫存放,盡量避免長時間置于水浴中。
2.按照每4 μl蛋白樣品加入1 μl 5×非變性蛋白上樣緩沖液的比例,混合蛋白樣品和5×非變性蛋白上樣緩沖液。
3.直接上樣到PAGE膠加樣孔內即可。
4.通常電泳至藍色染料到達膠的底端處附近即可停止電泳。
儲存條件:-20℃,有效期一年。
名稱:ECL化學發光法檢測試劑盒(兔IgG)
貨號:QN1157
規格:1盒
本試劑盒主要用于western blotting的化學發光顯色,含有HRP標記抗兔IgG二抗。
SDS-PAGE電泳后,蛋白質按照分子量大小分離,轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)后,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質,以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原,與對應的抗體起免疫反應,再與酶標記的第二抗體起反應,加入發光底物后,能讓膠片感光。經顯影和定影后,可以在膠片上顯示出條帶(抗原所在位置)。
試劑盒組分:
封閉試劑———————————30g(可配制400ml)
10倍濃縮抗體稀釋液——————50ml
HRP標記兔IgG二抗———————0.3ml,效價1:500~1000
ECL顯色液-——————————25mlA+25mlB
常規電泳轉膜后:
1)清洗轉印膜:將膜剝離下后,作好標記,一般在左上角剪一缺口。室溫用TBS-T漂洗3次每次5min,以盡量洗去轉印膜上的SDS,防止影響后面的抗體結合。
2)按5g封閉試劑加100ml雙蒸水計,配制膜封閉液,配好的膜封閉液為乳白色懸液,將漂洗過的轉印膜放入封閉液內,置搖床孵育,室溫封閉30min。用TBS-T緩沖液(PH7.6)洗膜,室溫漂洗3次每次5min。
3)將10×抗體稀釋液用雙蒸水稀釋成1×(10ml,10×抗體稀釋液加入90ml雙蒸水,混勻,可4℃保存三個月)。此稀釋液可作為一抗和二抗的稀釋液。
4)用1×的抗體稀釋液稀釋一抗。根據用量以及一抗的推薦稀釋濃度來稀釋一抗。將雜交膜放入雜交袋中,加入一抗工作液,封口,4℃孵育過夜或37℃搖動孵育2h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次。
注:如果所加一抗不同,可在此步將膜沿電泳方向剪成條,分別作好標記,分開孵育。
5)用TBS-T緩沖液(PH7.6)洗膜,室溫漂洗3次每次5min。
6)用1×的抗體稀釋液稀釋二抗。根據用量,按10ml抗體稀釋液加入15ul的HRP標記二抗的比例,配制二抗工作液。將雜交膜放入雜交袋中,加入二抗工作液,封口,37℃搖動孵育1h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次。
7)用TBS-T緩沖液(PH7.6)洗膜,室溫漂洗3次每次10min。
8)根據用量,取ECL發光液A、B等量混勻,加在膜正面,暗室顯色1~5分種。傾去顯色液,小心用紙吸去顯色液,在上面蓋一層平整的透明紙。再取出感光膠片,做好標記,輕輕的放在膜上,顯色30秒到1分鐘,取出膠片浸入顯影液中,觀察顯色情況,再放入定影液中1分鐘。根據條帶強弱,再次感光時可減短或者加長感光時間(從5秒到30分鐘)以期達到理想結果。
注意事項:
1.請根據一抗來源選擇試劑盒。
2.可以根據顯色結果來優化實驗反應時間。如背景過深,可延長膜封閉時間,加長zuì終漂洗次數與時間。如果
條帶過弱,可增加抗體濃度,可延長抗體孵育時間或加長感光時間。
3.TBS-T(0.01M,PH7.6)配制方法:稱取NaCl 8.5g,Tris 1.21g,用800ml的雙蒸水溶解,用鹽酸調PH到7.6,再加入0.5ml Tween-20,用雙蒸水加至1000ml,混勻即可。(也可按照自己的配制習慣來配制)
儲存條件:-20℃避光,有效期一年。
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