通用型總RNA提取試劑（含指示劑由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于生化實驗研究等領域，本品質量穩定，價位合理，需要通用型總RNA提取試劑（含指示劑等RNA提取純化產品的客戶，請到我公司官網聯系我們。...

特別提示：包括通用型總RNA提取試劑（含指示劑)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：通用型總RNA提取試劑（含指示劑)
英文名稱：Total RNA Extraction Reagent
產品貨號：WH0050
產品規格：100ml

本制品是在WH0065的基礎上zuì新推出的含有指示劑的總RNA提取試劑。該產品具有更強的裂解能力，更高的靈敏度，可從病毒、細菌、真菌、動物和植物細胞、組織、體液等樣本中提取總RNA的試劑。本制品能夠充分裂解樣本、溶解細胞內含物，并有效抑制RNase活性，提取樣本中的總RNA，同時保證了提取過程中RNA的完整性。該試劑對樣本起始量制，一個小時內即可完成反應。

產品特點：
·提取質量高：可在1h內提取得率高、純度高、完整性好的總RNA
·添加指示劑：添加了特殊指示劑，離心分層后下層為粉紅色，便于吸取上清
·靈敏度高：對病毒等微量樣本的提取具有更高的提取效率
·樣品處理量靈活：既可用于少量樣品（50-100mg組織、5×10⁶細胞）的總RNA提取，也可用于大量樣品（≥ 1g組織或≥ 10⁷細胞）的總RNA提取。

下游應用：
本制品提取的總RNAzuì大限度的消除了DNA和蛋白等雜質的污染，可直接用于Northern Blot、DotBlot、PolyA篩選、體外翻譯、RNase保護分析、cDNA文庫構建、RT-PCR、熒光定量PCR、高通量測序等各種分子生物學實驗。

不同組織或細胞RNA提取預期得率：

材料	RNA得率
植物葉片	100–500μg/g葉片
動物組織	6-10 μg/mg肝臟組織
動植物培養細胞	5–10 μg/106細胞
血液	3–5 μg/ml人類全血

保存條件：2–8℃避光保存12個月。

預防RNase污染，應注意以下幾方面：
1．經常更換新手套。因為皮膚經常帶有細菌，可能導致RNase污染。
2．使用RNase-Free的塑料制品和槍頭避免交叉污染。
3．RNA在本制品中時不會被RNase降解。但提取后繼續處理過程中應使用RNase-Free的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水徹底清洗，再滅菌，即可去除RNase。
4．配制溶液應使用RNase-Free ddH2O。（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.1%（V/V，放置過夜，高壓滅菌）。

注意事項：
1．勻漿后，加氯fǎng前，樣品可在-70℃放置一個月。
2．RNA沉淀可以保存在75%乙醇中，2-8℃一個星期以上或-20℃一年。

RNA提取操作步驟：
自備試劑：氯fǎng、異丙醇、RNase-Free ddH2O、75%乙醇（用RNase-Free ddH2O配制）

1．樣品處理
a．植物組織：以葉片RNA提取為例。取新鮮葉片在液氮中充分研磨或將葉片剪碎后直接在本制品中研磨，研磨要迅速，zuì好不要超過1 min。大約100mg葉片使用1ml本制品。
b．動物組織：以鼠肝臟RNA提取為例。取新鮮或-70℃凍存組織，每30-50 mg組織加入1ml本制品，用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積一般不要超過本制品體積的10%。
c．單層培養細胞：單層貼壁細胞的收集（收集細胞數量請不要超過1×10⁷）：可直接在培養容器中裂解（容器體積不超過10cm2）,或者使用胰蛋白酶處理后離心收集細胞沉淀。（在搖瓶中培養的單層貼壁細胞通常采用胰蛋白酶處理的方法）。
1)直接裂解法：直接在培養板中加入本制品裂解細胞，每10cm2面積加入1ml本制品。用取樣器吹打幾次。注意：本制品加量根據培養板面積決定，不是由細胞數決定。如果本制品加量不足，可能導致提取的RNA中有DNA污染。
2)胰蛋白酶處理法：確定細胞數量，吸除培養基，用PBS洗滌細胞，吸除PBS，向細胞中加入含有0.1-0.25%胰蛋白酶的PBS處理細胞，當細胞脫離容器壁時，加入含有血清的培養基失活胰蛋白酶，將細胞溶液轉移至RNase-free的離心管中，300×g離心5 min，收集細胞沉淀，仔細吸除所有上清。
  注意：收集細胞時一定要將細胞培養液去除干凈，否則會導致裂解不完全，造成RNA的產量降低。
d．細胞懸液：離心取細胞。每5×10⁶～1×10⁷動物細胞和植物細胞加入1ml本制品。加入本制品前不要洗滌細胞，以免降解mRNA。
e．血液與病毒液處理：直接取新鮮的血液或病毒液，加入3倍體積本制品（推薦0.2 ml全血或病毒液加入0.6 ml本制品)，充分振蕩混勻。
2．將勻漿樣品在室溫放置5 min，使得核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：4℃ 12000rpm（~13400×g)離心10min，取上清。
  注意：如果樣品中含有較多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物結節部分等，可離心去除。離心得到的沉淀中包括細胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織樣品時，上層是大量油脂，應除去。取澄清的勻漿溶液進行下一步操作。
4．每使用1ml本制品加0.2 ml氯fǎng，蓋好管蓋，劇烈振蕩15 sec，室溫放置3 min。
  注意：如不能旋渦混勻，可手動快速顛倒混勻2 min
5．4℃ 12000rpm（~13400×g)離心15 min。樣品會分成三層：粉色的有機相，中間層和上層無色的水相，RNA主要在水相中，把水相（約500μl）轉移到新的離心管中。（如果要分離DNA和蛋白質，可向我公司索取提取方法）。
6．在得到的水相溶液中加入等體積異丙醇，混勻，室溫放置10min。
7．4℃ 12000rpm（~13400×g)離心10min，去上清。離心前RNA沉淀經常是看不見的，離心后在管側和管底形成膠狀沉淀。
8．加入1ml 75%乙醇（用RNase-free ddH2O配制）洗滌沉淀。每使用1ml本制品至少用1ml 75%乙醇對沉淀進行洗滌。
9．4℃ 10000rpm （~9,391×g)離心5 min。倒出液體，注意不要倒出沉淀，剩余的少量液體短暫離心，然后用槍頭吸出，注意不要吸棄沉淀。
10．室溫放置晾干（不要晾的過干，RNA完全干燥后會很難溶解，大約晾干2-3 min左右即可），根據實驗需要，加入30-100 μl RNase-Free ddH2O，反復吹打、混勻，充分溶解RNA。

常見問題解答：

低得率：
A．樣品裂解或勻漿處理不徹底。
B．zuì后得到的RNA沉淀未完全溶解。

A260/A280<1.65
A．檢測吸光度時，RNA樣品不是溶于TE，而是溶于水。低離子濃度和低pH條件下，A280值會較高。
B．樣品勻漿時加的試劑量太少。
C．勻漿后樣品未在室溫放置5 min。
D．水相中混有有機相。
E．zuì后得到的RNA沉淀未完全溶解。

RNA降解：
A．組織取出后沒有馬上處理或冷凍。
B．樣品或提取的RNA沉淀保存于-5℃– -20℃，未在-60℃– -70℃保存。
C．細胞在胰蛋白酶處理時被破壞。
D．溶液或離心管未經RNase去除處理。
E．電泳時使用的甲酰胺pH低于3.5。

DNA污染：
A．樣品勻漿時加的試劑體積太少。
B．樣品中含有組織溶劑（如乙醇，DMSO等），強緩沖液或堿性溶液。

蛋白和多糖污染：
A．樣品中蛋白、多糖含量高。
B．樣品量太大。
C．水相中混有有機相。

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貨號	名稱	規格
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名稱：石蠟包埋組織RNA提取試劑盒
貨號：BTN81102
規格：30次
石蠟包埋組織本是珍貴的分子生物學研究材料，但是由于它們的保存時間一般都比較長，很不容易從中提取到可以進行PCR的RNA，存在的主要問題是RNA的降解和脫蠟過程中樣品的丟失。本產品是專門用于從甲醛和非甲醛固定的石蠟包埋組織中快提RNA的試劑

試劑盒特點：
1.一管式操作，避免了可能的交叉污染和樣品RNA的丟失。
2.含一步離心式脫蠟試劑，不需要使用有毒的二甲苯，健康環保。
3. 能有效去除基因組DNA的污染，得到的RNA可直接用于RT-PCR反應。
4. 即開即用，客戶自己不需要準備額外的試劑。

試劑盒組成：

成分	規格
溶液A	30mL
溶液B	3mL
溶液C	5mL
溶液D	15mL
微量核酸沉淀劑	30mL
RNase-free水	10mL
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸，4℃保存(溶液C需要-20℃放置)，有效期一年。

使用方法：
1. 將5片厚度為6-8μM的石蠟包埋組織切片轉移到1.5mL塑料離心管(zuì好使用螺旋蓋離心管)中并加入1mL溶液A，在振蕩器上以zuì大速度振蕩10秒。
2. 加入75μL溶液B，在振蕩器上以zuì大速度振蕩10秒。
3. 7000×g室溫離心2分鐘，溶液將形成兩個相，其中組織切片位于下相。
4.小心吸棄上層液體。
5. 將離心管放入真空離心機中抽干下層的液體，一般需要一小時。
6. 加入150μL溶液C，55℃保溫過夜。
7. 短暫離心，95℃保溫10分鐘。
8. 加入0.5mL溶液D，充分震蕩半分鐘。
9. 加入0.1mL自備氯fǎng，振蕩器上充分振蕩混均30秒。
10. 13000-5000×g室溫離心3～5分鐘。
11. 將上清液(約0.6mL)轉移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中。下層有機相(藍色)和中間層含有DNA和蛋白質，避免觸及，否則將產生蛋白質和DNA污染。為保險起見，可以留下100μL上清液不取。同時吸取上清時zuì好緩慢進行，否則容易吸出交界面的不可見的DNA。
12.在上清液中加入兩倍體積的微量核酸沉淀劑，振蕩器上振蕩30秒混勻。
13. 13000-15000g室溫離心5分鐘，離心底的側面將形成RNA沉淀。如果需要提高RNA回收率，可以將離心時間延長到20或30分鐘。
14.小心吸棄上清液，注意不要吸棄RNA沉淀。
15.在含RNA沉淀的離心管中加入1mL自備的75%乙醇，振蕩混勻30秒。
16. 13000-15000g室溫離心1分鐘。
17.小心吸棄上清液，注意不要吸棄RNA沉淀。
18. 短暫快速離心，用移液槍小心吸棄殘留乙醇(約50μL)。注意不要吸棄沉淀。此步十分重要，否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。
19.室溫放1-2分鐘后立即加入50-100μL RNA溶解液使RNA沉淀溶解。千萬不要用真空離心法使RNA沉淀過于干燥，否則RNA將變得十分難溶。樣品立即使用或存放于-80℃待用。
20. RNA完整性的電泳檢測：
21. RNA產量產率測定：將5-10μL RNA溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進而計算出RNA的產量(濃度×體積)和產率(RNA產量/組織用量)。
22. RNA純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關)，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質污染，但一般不影響RT-PCR等反應。

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