WH0086 超純dAGP溶液(100mM)

超純dAGP溶液(100mM)是高品質(zhì)的核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品,由北京百奧萊博供應(yīng),本產(chǎn)品用于科學(xué)研究,我公司專注于核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng),為您提供的超純dAGP溶液(100mM)質(zhì)量可靠,批間差小,且價(jià)格公道,熱切盼望您選購(gòu)我們的產(chǎn)品。...
特別提示:包括超純dAGP溶液(100mM)在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:超純dAGP溶液(100mM)
英文名稱:Super Pure dAGP Solution
產(chǎn)品貨號(hào):WH0086
產(chǎn)品規(guī)格:0.5ml
本制品經(jīng)過(guò)PCR檢測(cè)的脫氧核苷酸,可與所有的耐熱聚合酶配套使用。dGTP純度達(dá)到99.5%以上,不含DNase和RNase。
儲(chǔ)存條件:-20℃長(zhǎng)期保存
根據(jù)您的關(guān)注的超純dAGP溶液(100mM),您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求:
BTN130815 taq酶抗體 500U
YT373 YT Taq DNA聚合酶(Taq酶)(含buffer) 200U|1000U
YT389 dNTP套裝(100mM) 4×50μl
RFT093 2×pfu PCR MasterMix 500μl|5×500μl
RFT095 2×Taq PCR MasterMix 500μl|5×500μl
RFT107 RNase抑制劑 2000U|5×2000U
SY0032 2×Long PCR Master Mix(不含染料) 1ml
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名稱:石蠟包埋組織直接RT-PCR試劑盒(免RNA提取)
貨號(hào):BTN131176
規(guī)格:30次
名稱:6nt隨機(jī)引物(抗水解)(0.5mM)
貨號(hào):BTN120679
規(guī)格:100μL
本產(chǎn)品為具有外切酶抗性的隨機(jī)引物,是單鏈隨機(jī)寡核苷酸混合物,可、隨機(jī)引發(fā)不同DNA的合成反應(yīng)。本產(chǎn)品含有2個(gè)3′-末端硫代磷酸酯(PTO)修飾,對(duì)校正DNA聚合酶的3′至5′外切核酸酶有抗性。該引物還含有5′和3′-羥基末端。本產(chǎn)品濃度為500μm,可用于基因組DNA和質(zhì)粒的鏈置換擴(kuò)增以及隨機(jī)引發(fā)的DNA標(biāo)記。
儲(chǔ)存條件:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期兩年。
名稱:兩管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)
貨號(hào):BTN80206
規(guī)格:50次
本試劑盒是整合cDNA鏈合成試劑和即用型PCR 試劑而得的RT-PCR試劑盒。cDNA鏈合成反應(yīng)和PCR反應(yīng)分別在兩個(gè)離心管中進(jìn)行。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,足夠50次RT反應(yīng)(20μL體系)和600次PCR反應(yīng)(30μL體系)。
2. cDNA鏈合成試劑盒可靈活選用隨機(jī)引物、Oligo dT引物或基因?qū)R灰铮m合各種情況。
3. PCR試劑盒具有即用、簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn),PCR mix中含上樣染料,所以PCR產(chǎn)物可以直接上樣電泳。
4. 兩管式操作,RT和PCR在不同試管中進(jìn)行,便于單獨(dú)優(yōu)化RT反應(yīng)或PCR反應(yīng)條件。
5.擴(kuò)增效率高,zuì長(zhǎng)可擴(kuò)增5Kbp以上的RNA。
試劑盒組成:
| 成分 | 規(guī)格 |
| MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含RI) | 100μl |
| RT Buffer(含dNTP) | 300μl |
| Oligo(dT)18引物(0.5μg/μL) | 50μl |
| 隨機(jī)引物(0.2μg/μL) | 50μl |
| RNase-free 水 | 10ml |
| PCR MagicMix 3.0 | 9ml |
| 專用染料 | 360μl |
| 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
儲(chǔ)存條件:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
一、樣品RNA的制備(本試劑盒不提供相關(guān)試劑)
1、可用自本公司各種RNA提取方法提取樣品的RNA,也可以選用其他供應(yīng)商的產(chǎn)品,但得到的RNA一定要溶解在RNase-free的超純水中。
二:RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應(yīng)合成cDNA
1. 按下表配制RT反應(yīng)體系(20μl體系):
| RNA模板 | |
| 總RNA | 100-500ng |
| 或poly(A)mRNA | 10-500 ng |
| 或?qū)R坏腞NA(如體外轉(zhuǎn)錄制備的) | 0.01pg-500ng |
| 引物 | |
| Oligo(dT)18(0.5μg/μL) | 1μL |
| 或隨機(jī)引物(0.2μg/μL) | 1μL |
| 或自備模板專一反向引物(10pmol/μL) | 1-2μL |
| RNase-free水 | 補(bǔ)水到12μL |
注意:RNA樣品不能含有基因組DNA污染。隨機(jī)引物與RNA 模板的比例將決定cDNA 合成的平均長(zhǎng)度(成反比)。一般情況下隨機(jī)引物效率好于OligodT引物,但如果只想轉(zhuǎn)錄總RNA中的mRNA(只占5%左右),則可優(yōu)先選用OligodT引物,這樣就可以排除非mRNA的干擾。
2. 70℃保溫5分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 按順序加入6μL RT Buffer(含dNTP)和2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含RI),反應(yīng)終體積為20μl。
4. 42℃保溫60分鐘。此步為RT反應(yīng)。
5. 70℃保溫10分鐘以終止反應(yīng),然后放置在冰上待用。
6. 合成的cDNA可以直接作為PCR 模板使用,不需要純化。剩余樣品可以放置在-20℃長(zhǎng)期保存。
三、PCR(30μL體系)
1、將全部專用染料加入到PCR MagicMix 3.0中,輕柔顛倒混勻即可使用。未用完的部分需要在-20℃。也可以不加專用染料,但在PCR結(jié)束后,電泳上樣前,則需要加入電泳上樣液,否則電泳時(shí)沒(méi)法判斷電泳速度。
2、在PCR 管中加入下列成分:
| 成份 | 加入量 |
| PCR MagicMix 3.0(已加染料) | 15μl |
| cDNA樣品(上步的RT反應(yīng)液) | 1-5μl |
| 模板專一性正向引物(10 pmol/μL) | 1-2μl |
| 模板專一性反向引物(10 pmol/μL) | 1-2μl |
| 補(bǔ)水到 | 30μl |
注意:cDNA 也可以稀釋后用作PCR 模板。是否稀釋或稀釋多少倍完全取決于靶基因的豐度。
3、PCR反應(yīng)參數(shù)(需要根據(jù)模板和引物決定,下面的只做參考):
| 過(guò)程 | 溫度 | 時(shí)間 |
| 預(yù)變性 | 94℃ | 5min |
| PCR反應(yīng)(35個(gè)循環(huán)) | 94℃ | 1min |
| 55℃ | 1min | |
| 72℃ | 2min | |
| zuì后延伸 | 72℃ | 10min |
四、電泳檢測(cè)
取5-0μl PCR產(chǎn)物直接在PAGE或瓊脂糖凝膠上電泳,跟分子量標(biāo)準(zhǔn)比較估計(jì)出擴(kuò)增產(chǎn)物的大小。
注:本試劑盒中的PCR mix含有甘油和染料,可以直接上樣,不需要額外再加電泳上樣液。
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