WE0122 FastStar熱啟動(dòng)DNA聚合
- 產(chǎn)品/服務(wù)：WE0122 FastStar熱啟動(dòng)DNA聚合
- 型 號：WE0122
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價(jià)：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：1055
產(chǎn)品簡介
FastStar熱啟動(dòng)DNA聚合由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科學(xué)研究，我公司專注于核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的FastStar熱啟動(dòng)DNA聚合質(zhì)量可靠，批間差小，且價(jià)格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示：包括FastStar熱啟動(dòng)DNA聚合酶在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：FastStar熱啟動(dòng)DNA聚合酶
英文名稱：HotStar DNA Polymerase
產(chǎn)品貨號：WE0122
產(chǎn)品規(guī)格：500U|2500U
HotStar DNA Polymerase是抗Taq酶單克隆抗體和WE0101 Taq DNA Polymerase的混合制品，適用于Hot Start PCR。使用Taq酶抗體進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，高溫變性前由于Taq酶抗體與Taq酶結(jié)合抑制DNA聚合酶活性，能夠在低溫條件下有效抑制引物的非特異性退火及引物二聚體引起的非特異性擴(kuò)增。Taq酶抗體在PCR反應(yīng)zuì初的DNA變性步驟中變性，DNA聚合酶活性恢復(fù)，達(dá)到熱啟動(dòng)效果。使用本品無需特殊地對Taq酶抗體失活處理，可以在常規(guī)PCR反應(yīng)條件下使用。
HotStar DNA Polymerase具有5"→3"DNA聚合酶活性和5"→3"外切酶活性，無3"→5"外切酶活性，酶延伸速度2 kb/min，可以擴(kuò)增長度達(dá)5 kb的片段。擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物3"端附有一個(gè)“A”堿基，因此可直接用于T/A克隆。本產(chǎn)品具有延伸速度快、擴(kuò)增效率高的特點(diǎn)，主要適用于PCR法擴(kuò)增DNA片段、DNA序列測定等實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品組成：
| 組份 | 500U | 2500U |
| HotStar DNA Polymerase, 5 U/μl | 100μl | 5×100μl |
| 10×PCR Buffer | 1.8ml | 5×1.8ml |
注意：本產(chǎn)品的10×PCR Buffer中含有15 mM鎂離子。
活性定義：用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在74℃，30分鐘內(nèi)，將10 nmol脫氧核苷酸摻入到酸性不溶物質(zhì)所需的酶量定義為1個(gè)活性單位(U)。
質(zhì)量控制：
1、經(jīng)過多次柱純化，SDS-PAGE檢測其純度大于99%；
2、經(jīng)檢測無外源核酸酶活性；
3、PCR方法檢測無宿主殘余DNA；
4、能有效地?cái)U(kuò)增人基因組中的單拷貝基因。
使用方法：
以下舉例為以人基因組DNA為模板，擴(kuò)增1 kb的片段的PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)和優(yōu)化。
1、PCR反應(yīng)體系
| 試劑 | 50μl反應(yīng)體系 | 終濃度 |
| 10×PCR Buffer | 5μl | 1× |
| dNTP Mix，10 mM each | 1μl | 200μM each |
| Forward Primer，10μM | 2μl | 0.4μM |
| Reverse Primer，10μM | 2μl | 0.4μM |
| Template DNA | <0.5μg | <0.5μg/50μl |
| HotStar DNA Polymerase,5U/μl | 0.25-0.5μl | 1.25-2.5 U/50μl |
| ddH2O | up to 50μl |
注意：可以在室溫下配制反應(yīng)液，須將試劑置于冰上。
2、PCR反應(yīng)條件
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
| 預(yù)變性 | 94℃ | 2 min | |
| 變性 | 94℃ | 30 s | 25-35個(gè)循環(huán) |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 30 s | |
| 終延伸 | 72℃ | 2 min |
注意：
1)一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引物的熔解溫度Tm低5℃，無法得到理想的擴(kuò)增效率時(shí)，適當(dāng)降低退火溫度。
2)延伸時(shí)間應(yīng)根據(jù)所擴(kuò)增片段大小設(shè)定。
3)可根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，錯(cuò)配機(jī)率會(huì)增加，非特異性背景嚴(yán)重。所以在保證產(chǎn)物得率的前提下應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)。
儲(chǔ)存條件：-20℃，避免反復(fù)凍融。
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