SNM452 蛋白上樣緩沖液(非還原，5X)
- 產(chǎn)品/服務(wù)：SNM452 蛋白上樣緩沖液(非還原，5X)
- 型 號：SNM452
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：971
產(chǎn)品簡介
北京百奧萊博供應(yīng)的蛋白上樣緩沖液(非還原，5X)用于科研試驗(yàn)，我公司專注于蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的蛋白上樣緩沖液(非還原，5X)質(zhì)量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示：包括蛋白上樣緩沖液(非還原，5X)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：蛋白上樣緩沖液(非還原，5X)
英文名稱：The protein sample buffer
產(chǎn)品貨號：SNM452
產(chǎn)品規(guī)格：10ml
根據(jù)您的關(guān)注的蛋白上樣緩沖液(非還原，5X)，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：
名稱：Ni瓊脂糖凝膠
貨號：WE0272
規(guī)格：10ml
該鎳柱純化系統(tǒng)對6×His-tag蛋白具有顯著特異吸附能力，能夠一步純化帶有6個組氨酸親和標(biāo)簽的蛋白。該系統(tǒng)具有4個Ni2+螯合位點(diǎn)，較只有3個螯合位點(diǎn)的Ni-IDA結(jié)合Ni2+更為牢固，有效防止純化過程中Ni2+脫落且增強(qiáng)對His標(biāo)簽蛋白的結(jié)合能力，提高純化效率。較高的基團(tuán)密度，大大提高了蛋白載量。該系統(tǒng)在天然或變性條件下，對來源于各種表達(dá)系統(tǒng)(如桿狀病毒，哺乳細(xì)胞，酵母以及細(xì)菌)中的His標(biāo)簽蛋白，均有很好的純化效果。本產(chǎn)品已螯合鎳離子，可直接使用，方便，快捷。
支持物：CL-6B瓊脂糖凝膠
載量：20-30 mg His標(biāo)簽蛋白/ml填料
粒徑：50-160μM
注意事項：
1、緩沖液中不建議使用 β-巰基乙醇、DTT或EDTA。
2、整個純化過程中切忌凝膠脫水變干。
3、為提高純化效率，先確定Binding Buffer和Elution Buffer中咪唑的zuì佳使用濃度。可以使用線性或梯度濃度的咪唑(20-500 mM)洗脫蛋白，并通過SDS-PAGE或Western Blotting來檢測目的蛋白的純度。
4、為避免柱子被堵塞，請使用高純度的試劑配制緩沖液，并通過0.45μM過濾器過濾。建議將裂解液進(jìn)行離心，或者使用0.45μM過濾器過濾。
5、柱再生時，保證每步洗完后都要用足夠的去離子水沖洗至中性。
使用方法：
I 緩沖液的準(zhǔn)備
1、可溶性蛋白純化緩沖液配方：
| 成分 | Tris-HCl(PH 7.9) | 咪唑 | 氯化鈉 |
| Soluble Binding Buffer | 20 mM | 10 mM | 0.5 M |
| Soluble Elution Buffer | 20 mM | 500 mM | 0.5 M |
2、包涵體蛋白純化緩沖液配方：
| 成分 | Tris-HCl(PH 7.9) | 咪唑 | 氯化鈉 | 尿素/鹽酸胍 |
| Inclusion Body Binding Buffer | 20 mM | 5 mM | 0.5 M | 8 M/6 M |
| Inclusion Body Elution Buffer | 20 mM | 500 mM | 0.5 M | 8 M/6 M |
II 組裝層析柱
1、將Ni-Agarose Resin填料混勻后加入層析柱，室溫靜置10分鐘，待凝膠與溶液分層后，把底部的出液口打開，讓乙醇通過重力作用緩慢流出。
注意：
1)填料的上層是乙醇保護(hù)層，將填料和乙醇一起混勻，以每ml填料純化20-30mg His標(biāo)簽蛋白計算，取需要的填料與乙醇的混合液加入層析柱。
2)本實(shí)驗(yàn)是通過重力作用使溶液流出，如果溶液不流出，可以給柱子一個外力，例如用大拇指對柱口輕輕按壓一下，迫使其流出。
2、向裝填好的柱中加入5倍柱體積的去離子水將乙醇沖洗干凈后，再用10倍柱體積的Binding Buffer平衡柱子，平衡結(jié)束后即可上樣。
注意：柱體積指的是填料的體積。
III 可溶性蛋白的純化
1、收集菌體后，每100 mg菌體(濕重)加入1-5ml細(xì)菌裂解液，超聲裂解菌體。10000×g離心10分鐘后，收集上清。
2、將上清液過柱，流速為10倍柱體積/小時。
3、使用15倍柱體積的Soluble Binding Buffer沖洗柱子，收集流穿峰。
4、使用5倍柱體積的Soluble Elution Buffer洗脫，收集洗脫峰。
5、洗脫后，依次使用3倍柱體積的Soluble Binding Buffer和5倍柱體積的去離子水洗滌柱子，再用3倍柱體積的20%乙醇平衡(乙醇要將填料浸沒)，封柱后2～8℃保存。
Ⅳ 包涵體蛋白的純化
1、收集菌體后，每100 mg菌體(濕重)加入1-5ml 細(xì)菌裂解液，超聲裂解菌體。
2、離心，棄上清，將沉淀重懸于Soluble Binding Buffer 中(如有需要，可進(jìn)行超聲波處理，超聲前可加入1-5 mM 磷酸酶抑制劑混合物)。
3、重復(fù)操作2，直至包涵體清洗干凈(呈較潔凈的乳白色狀)。
4、將沉淀重懸于Inclusion Body Binding Buffer中，冰浴1小時，使包涵體溶解。
5、10000×g離心20分鐘，將上清以孔徑為0.45μM的濾膜過濾。
6、將蛋白溶液負(fù)載上柱，流速為10倍柱體積/小時。
7、使用15倍柱體積的Inclusion Body Binding Buffer沖洗柱子，收集流穿峰。
8、使用5倍柱體積的Inclusion Body Elution Buffer洗脫，收集洗脫峰。
9、洗脫后，依次使用3倍柱體積的Inclusion Body Binding Buffer和5倍柱體積的去離子水洗滌柱子，再用3倍柱體積的20%乙醇平衡(乙醇要將填料浸沒)，封柱后2～8℃保存。
注意：在純化包涵體蛋白時，所有緩沖液均含有變性劑，需要降低Binding Buffer中的咪唑濃度(5 mM或更低)。洗脫時，若蛋白在較高pH下洗脫失敗，可以選用低pH緩沖液作為洗脫緩沖液(pH6.5，pH5.9或pH4.5)。
Ⅴ 柱再生
當(dāng)填料使用多次后，結(jié)合效率會有所下降(表現(xiàn)為流速變慢或填料失去藍(lán)綠色)，可以用以下方法再生，提高填料的使用壽命和蛋白質(zhì)的結(jié)合效率。
1、使用2倍柱體積的6M鹽酸胍沖洗后，使用3倍柱體積的去離子水沖洗。
2、使用1倍柱體積2% SDS沖洗。
3、依次使用1倍柱體積的25%、50%、75%和5倍柱體積乙醇沖洗，再依次使用1倍柱體積的75%、50%、25%的乙醇沖洗。
4、使用1倍柱體積的去離子水沖洗。
5、使用5倍柱體積含50 mM EDTA緩沖液(PH8.0)沖洗。
6、使用3倍柱體積去離子水，3倍柱體積20%乙醇沖洗。
7、封柱后2～8℃保存。
8、再次使用前，需先使用10倍柱體積去離子水沖洗，然后使用5個柱體積的50 mM NiSO4再生，3個柱體積的Binding Buffer平衡。
儲存條件：2～8℃，避免冷凍
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