SYA114 鼠疫耶爾森菌
- 產(chǎn)品/服務(wù)：SYA114 鼠疫耶爾森菌
- 型 號：SYA114
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價(jià)：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：1160
產(chǎn)品簡介
北京百奧萊博供應(yīng)的鼠疫耶爾森菌用于科研目的，我公司的鼠疫耶爾森菌品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示：包括鼠疫耶爾森菌(鼠疫桿菌)單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：鼠疫耶爾森菌(鼠疫桿菌)單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：SYA114
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒
一、簡介：
本試劑盒用一對鼠疫桿菌特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對鼠疫桿菌進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。
二、用途：
本試劑盒適用于檢測全血等樣品中的鼠疫桿菌(YP)，用于鼠疫桿菌(YP)的輔助診斷，其檢測結(jié)果僅供臨床參考。
三、試劑盒組成：(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
YP反應(yīng)液(YP-qPCR MIX) 1管 672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5ml/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
陰性對照(NTC) 1管 50μL/管
YP陽性對照(YP-PTC) 1管 50μL/管
四、儲存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為6個(gè)月。
五、熒光PCR儀器適用范圍：
ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀等。
六、樣品的采集與RNA提取
6.1 樣品的采集
取抗凝血下層血細(xì)胞50μL，加入100μL雙蒸水吹勻。
6.2 RNA提取
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽液體，按以下說明進(jìn)行DNA核酸的提取。也可采購北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。
對上述處理好的樣本加入50μL核酸提取液，100℃恒溫處理10min，13000rpm離心5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5ml EP管，-20℃保存。
注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。
七、檢測步驟：
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(YP-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1μL N×1μL
總量 15 μL N×15μL
向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品/陰性對照(NTC)/陽性對照(YP-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qRT-PCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM，淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
八、結(jié)果分析：
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測結(jié)果。基線和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2 試驗(yàn)成立判定
（1） 陰性對照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
（2） 陽性對照(YP-PTC)：均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
（3） 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則，此次試驗(yàn)視為無效。
8.3 結(jié)果判定
（1） 在試驗(yàn)成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明鼠疫桿菌核酸陽性。
（2） Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明鼠疫桿菌核酸陰性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對數(shù)擴(kuò)增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
（4） 對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行鼠疫桿菌qPCR檢測。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽性，表明鼠疫桿菌核酸陽性；否則判為樣本陰性。
九、注意事項(xiàng)：
（1） 初次使用前請仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
（2） 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
（3） PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
（4） 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進(jìn)行，以免污染。
（5） 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。
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