WE0316 通用型免疫組化試劑盒
- 產品/服務：WE0316 通用型免疫組化試劑盒
- 型 號：WE0316
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：889
產品簡介
北京百奧萊博供應的通用型免疫組化試劑盒用于生化實驗研究等領域，我公司的通用型免疫組化試劑盒品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括通用型免疫組化試劑盒(鼠兔源一抗)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：通用型免疫組化試劑盒(鼠兔源一抗)
英文名稱：Rabbit & Mouse HRP Kit(DAB)
產品貨號：WE0316
產品規格：3ml
本試劑盒根據生物素與鏈霉親和素具有很強親和力的原理設計。 在兔源或鼠源的一抗與相應的靶抗原結合后，本試劑盒中的生物素化抗兔/鼠通用型二抗與一抗特異結合；二抗上標記的生物素與標記了過氧化物酶(HRP)的鏈霉親和素結合，形成抗原～特異性一抗～生物素化的二抗～HRP標記的鏈霉親和素復合物。HRP可以催化底物顯色，從而推斷待檢抗原的存在及分布。該試劑盒使用的生物素化二抗、SA-HRP，均采用優化的標記和純化技術，使得其染色有更高靈敏度和更低的背景，適合于檢測福爾馬林固定石蠟包埋組織切片，以及冰凍切片、細胞爬片、新鮮制備的血涂片等。兔/鼠通用型Streptavidin-HRP試劑盒適合與百奧萊博即用型或濃縮型抗體配套使用。
試劑盒組成：
| 組份 | 3ml |
| Solution A(Endogenous Peroxydase Enzymes Blocking Buffer，White Solution) | 3ml |
| Solution B(Normal Goat Serum For Blocking，White Solution) | 3ml |
| Solution C(Goat anti-Rabbit/Mouse IgG，Biotin，Ready to Use，Yellow Solution) | 3ml |
| Solution D(Streptavidin-HRP，Ready to Use，Red Solution) | 3ml |
| DAB-A(20×) | 250μl |
| DAB-B(1×) | 5ml |
注意事項：
1、以每張切片加入1滴(約50μl)計算，3ml可做60張切片， 18ml可做360張切片。
2、對于內源性生物素含量比較豐富的組織，使用本試劑盒時zuì好用內源性生物素阻斷劑進行封閉。
3、DAB工作液現配現用，配制好的工作液2～8℃避光1小時內有效。
4、實驗過程中避免組織片干燥，因此各步孵育時工作液用量必需充足，保證完全覆蓋組織樣本，且盡量在濕盒中進行孵育。
5、為獲得zuì佳實驗結果，請務必優化實驗條件及試劑用量。
6、DAB為可疑致癌物，使用時請采取必要的防護措施。
7、本產品僅用于科研，不能用于人體反應或人體治療。
操作步驟：
1、常規處理欲檢測的石蠟或冰凍組織切片或細胞爬片等樣本。
1)組織切片或細胞爬片染色前處理：
a. 石蠟切片
脫蠟水化：60oC烤片1小時，二甲苯脫蠟二次，每次5分鐘；再依次浸入梯度乙醇(無水乙醇－無水乙醇－95%－85%－75%乙醇)和蒸餾水中各5分鐘水化。
b. 冰凍切片和細胞爬片
切片(或爬片)浸于0.01 M pH7.4 PBS洗滌3次×5分鐘。然后用0.1%Triton X-100覆蓋組織(或細胞)浸潤15分鐘，0.01 M pH7.4 PBS洗滌2次×5分鐘。
2)石蠟切片的抗原修復：大大多數情況下，石蠟組織切片用檸檬酸緩沖液高壓修復都是適合的。
修復工作液配制：1 L去離子水中加入10ml檸檬酸緩沖液(IHC抗原修復液, 100×)(Cat#：WE0318)，混勻即可。
修復過程：修復液加入高壓鍋內，待修復切片浸于修復液中(必需沒過組織)，蓋上壓力鍋蓋，加熱至均勻噴汽，從噴汽開始計時，1~2分鐘后壓力鍋離開熱源，自然冷卻至室溫，取出切片，蒸餾水淋洗后，再用PBS(0.01 M pH7.4)漂洗2次，每次3分鐘。
2、滴加適量Solution A白色溶液，即內源性過氧化物酶封閉液室溫孵育10分鐘，PBS充分淋洗。
3、滴加適量Solution B白色溶液，即封閉用正常羊血清工作液，室溫孵育10分鐘，甩干。
4、滴加適量一抗工作液(商品化即用型抗體或適當比例稀釋的濃縮抗體)，按實驗要求孵育，然后PBS充分淋洗。
5、滴加適量Solution C黃色溶液，即生物素標記羊抗兔/鼠二抗工作液，室溫孵育10分鐘，PBS充分淋洗。
6、滴加適量Solution D紅色溶液，即HRP標記的鏈霉親和素，室溫孵育10分鐘，PBS充分淋洗。
7、DAB顯色工作液配制：根據需要量，將DAB-A和DAB-B以1：19的體積比混勻后即為DAB顯色工作液。也可選擇每毫升試劑B中滴加1滴(約50μl)試劑A，混勻即可。
8、顯色：加適量的DAB顯色工作液于需要顯色的組織切片或細胞爬片上即可顯色，顯色時間一般為1-5分鐘。顯微鏡下觀察控制顯色時間，當達到zuì佳顯色效果后，自來水沖洗終止顯色。顯色后的切片經復染、脫水透明，封片后可長期保存。
儲存條件：2～8℃
根據您的關注的通用型免疫組化試劑盒(鼠兔源一抗)，您可能還對以下產品有需求：
名稱：包涵體微量純化試劑盒
貨號：BTN90508
規格：20次
包涵體是指超表達的蛋白在細胞胞漿內(如果超表達的是胞漿蛋白)或膜間內(如果超表達的是分泌蛋白)凝集形成的無活性的固體顆粒。包涵體形成的主要原因是在重組蛋白的表達過程中缺乏某些蛋白折疊輔助因子，或環境不適導致無法形成正確的蛋白質次級鍵。由于包涵體主要由超表達的重組蛋白質組成，因此分離純化包涵體是分離純化具有活性的重組蛋白的步。本產品就是用于快速的提取高質量的包涵體。
產品特點：
1．操作簡單快速，整個過程只要三十分鐘左右。
2．微量純化，可以在1.5mL離心管中完成。
3．能有效去除包涵體中的細胞壁和細胞膜等非重組蛋白成份，使重組蛋白所占比重達到60%以上。
4．A型用于超聲法裂菌，B型用于酶法裂菌。
5．可以選擇鹽酸胍和尿素兩種蛋白溶解方式。
6．得到的包涵體溶解液可以用于重折疊、SDS-PAGE或其他純化處理。
試劑盒組成：
| 成分 | 20T(A型) | 20T(B型) |
| 溶液A | 5ml | 5ml |
| 溶液B | 50ml | 50ml |
| 包涵體溶解液 | 5ml | 5ml |
| 尿素 | 5g | 5g |
| 溶菌酶 | 無 | 600mg |
|
Benzo | 無 | 20μl |
儲存條件：常溫運輸和保存(B型的溶菌酶和Benzo
使用方法：
一、超聲法裂菌(只適用于A型)
1．在蛋白誘導期結束時，轉移1.5mL菌液到一個干凈的塑料離心管中。zuì好同時處理不加誘導物的細菌做對照樣。
2．12000rpm室溫離心1分鐘，小心棄上清。沉淀(約10mg)放冰上待用或放-80℃保存。
3．加入250μL 冰浴的溶液A，冰上超聲裂解菌體直到在顯微鏡下看見大多數細胞破裂。超聲參數需根據儀器型號自行摸索，但裂解物必須不粘稠，否則不容易沉淀包涵體。
4．直接進入第14步。
二、酶法裂菌(只適用于B型)
5．將600mg 溶菌酶全部加入到5mL溶液A中溶解，然后根據每次的需要量(一次微量提取需要250μl)分成小份放-20℃待用。每次只取用一管。
6．包涵體中的重組蛋白一般比溶解狀態中的蛋白質更能夠抵抗微量內源性蛋白水解酶的降解，如果實驗發現得到的重組蛋白確有降解，則需要在溶液A中新鮮加入自備的蛋白酶抑制劑混合物(BTN80808)。
7．在蛋白誘導期結束時，轉移1.5mL菌液到一個干凈的塑料離心管中。zuì好同時處理不加誘導物的細菌做對照樣。
8．12000rpm室溫離心1分鐘，小心棄上清。
9．加入250μL含溶菌酶的溶液A重懸細胞。
10．室溫放置10-20分鐘裂解細菌，其間可以用手輕彈離心管混勻。
11．-20℃冷凍至凝固，一定要凝固到細菌溶液變成固體為止。
12．室溫水浴解凍。如果裂解充分，細菌釋放出的DNA 將使裂解物十分粘稠。如果不粘稠，說明裂解不充分，需要重復凍融步，否則完整細菌將和包涵體一起沉淀，影響包涵體的純度。zuì好在顯微鏡下檢查細菌是否充分裂解。
13．加入1μL Benzo
14．12000rpm 4℃離心5分鐘，留存上清作為SDS-PAGE 對照樣品一。
15．將沉淀(包涵體)懸浮在1mL的溶液B中，輕柔混勻后室溫放置5分鐘。
16．12000rpm 4℃離心10分鐘，留存上清作包涵體洗滌的對照樣品二。
17．將沉淀(包涵體)懸浮在1mL的溶液B中，輕柔混勻后室溫放置5分鐘。
18．12000rpm 4℃離心10分鐘，留存上清作包涵體洗滌的對照樣品三。本產品提供的溶液B足夠兩次洗滌(兩次洗滌一般可得到足夠純凈的包涵體)。如果需要更多洗滌，用戶需要單獨購買包涵體洗滌液(溶液B)
19．沉淀為純化的包涵體，可以長期放置在冰箱待用或直接用于包涵體溶解。
三、包涵體的溶解：
20.在包涵體沉淀中加入250μL包涵體溶解液，用槍頭充分吹打后漩渦震蕩室溫放置1小時使蛋白質充分溶解。注意：包涵體溶解液含6M 鹽酸胍，溶解蛋白能力強于含8M尿素的溶解液，但SDS-PAGE時不能直接上樣。客戶也可以用本試劑盒提供的尿素干粉自配8-10 M 尿素的溶液(尿素溶液不穩定，所以不能長期放置)溶解包涵體，得到的溶解液可以直接用于SDS-PAGE或后續純化。但其溶解能力弱于鹽酸胍。
21. 20000g 4℃離心20分鐘，小心收集上清，保留不溶性沉淀(未能溶解的包涵體)。SDS-PAGE 檢查是否大部分重組蛋白都在上清中。如果沒有，說明包涵體沒有完全溶解，需要用適當增加包涵體溶解液的用量。
22. 所得蛋白質溶液可以用于復性等試驗。用戶可本公司購買包涵體復性套裝。
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