JN0189 哺乳動物細胞蛋白抽提試劑
- 產品/服務：JN0189 哺乳動物細胞蛋白抽提試劑
- 型 號：JN0189
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-05-31
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：812
產品簡介
我公司致力于為客戶提供高純度、低成本的活性重組蛋白，包括哺乳動物細胞蛋白抽提試劑在內的各類受體、細胞因子、生長因子、轉錄因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。...
產品詳細介紹
特別提示：包括哺乳動物細胞蛋白抽提試劑在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：哺乳動物細胞蛋白抽提試劑
產品貨號：JN0189
產品規格：100ml|500ml
哺乳動物細胞總蛋白抽提試劑是一種采用溫和表面活性劑的細胞裂解試劑，該試劑在低濃度即能溶解細胞膜，不會引起蛋白質變性，抽提的蛋白可用于進一步的分析檢測實驗或下游的分離純化。利用本產品抽提效率高，得到的蛋白量高于反復凍融法或者超聲法。本產品對懸浮或貼壁生長的細胞都有很高的抽提效率，無需將貼壁細胞進行消化收集。
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名稱：石蠟包埋組織蛋白提取試劑盒
貨號：BTN130888
規格：50次
石蠟包埋組織是很重要的臨床材料，研究其正常細胞和疾病相關的細胞，特別是癌細胞中標記蛋白的差異表達水平，對于判斷癌化的進展，癌癥的類型的判定，以方便于診斷和治療有重要的意義，然而體外培養的細胞的蛋白差異表達水平并不能夠真實反映體內細胞的真實狀況，因此從石蠟包埋組織中提取蛋白并且加以研究有很重要的意義，本試劑盒通過特殊的快速脫蠟試劑和蛋白質抽提試劑，在兩種不同的溫度條件下溫育，可以將被鉸鏈的蛋白質釋放出來，經過簡單的離心步驟，上清中含有的蛋白經過沉淀洗滌和溶解后，可以用于Western Blot 、SDS-PAGE、ELISA、2D電泳或蛋白質芯片分析等，本試劑盒可以使用50次左右。
產品特點：
1. 不含有去污試劑，適用于非染色的標本。
2.可以適用于甲醛浸泡的組織標本。
3. 不需要超速離心，可以同時處理多個標本。
試劑盒組成：
| 成份 | 規格 |
| 預處理試劑A | 100mL |
| 預處理試劑B | 5mL |
| 提取試劑 | 5mL |
| 沉淀試劑 | 75mL |
| DTT干粉 | 80mg |
| 使用手冊 | 1份 |
儲存條件：常溫下運輸和保存，但DTT和提取試劑需要4℃保存，盛裝預處理試劑A的瓶子已經密封，請在使用后，將剩余的預處理試劑A倒入一個有內蓋的瓶中，同時蓋緊內外蓋，以防止揮發。盛裝預處理試劑A，B和沉淀試劑的瓶蓋要蓋緊，同時避免火源。
使用方法：
1. 取兩塊大約10-15μm厚，100mm2石蠟包埋組織切片到1.5mL的干凈離心管中，加入1mL預處理試劑A，高速渦懸震蕩30 sec，室溫靜置5 min，期間偶爾顛倒離心管數次。
2. 加入100μL預處理試劑B，渦懸震蕩10sec，再10000rpm(10000g)離心2min，移去上下兩層的液體。
3. 用500μL的超純水清洗脫蠟的組織兩次，離心并盡量吸去液體，保留組織塊沉淀。
4. 加入100μL提取試劑(用前需要將DTT全部加入到裝提取試劑的瓶中，搖晃混勻，未用完的提取試劑需要4℃放置)，蓋上蓋子，渦懸震蕩數秒。
5.在水浴鍋中100℃加熱20 min，短暫離心一下，再用組織研磨棒將切片組織磨碎。
6.在水浴鍋中60℃加熱2 hour，期間大約每20 min取出，震蕩一次。
7. 4℃，12000rpm(12830 g)離心15 min，小心將上清轉移到一個新的1.5mL的干凈離心管中。注意：在上清中的蛋白質可以在4℃的環境條件下保存一個星期，如果需要長期保存，請放置在-20℃的環境中，同時避免 反復凍溶，也可以使用我公司生產的非干擾型蛋白濃度測定試劑盒對上清中的蛋白質直接定量。
8. 加入1mL的沉淀試劑，渦懸震蕩10 sec，在4℃的環境中保持10 min。
9. 4℃，12000rpm離心15 min，去除上清，保留沉淀。
10. 加入0.5mL的沉淀試劑，渦懸震蕩10 sec，在4℃的環境中保持10 min，再4℃，12000rpm離心15 min，去除上清，保留沉淀，在通風櫥中將試管倒置在濾紙上，讓殘余的液體揮發干凈。
11. 將固體沉淀溶解于合適的自備的緩沖液中，再4℃，12000rpm離心5 min，收集上清，用于SDS-PAGE，Western blot等實驗。注意：此上清中含有DNA，RNA 殘留，所以溶液有些發粘，加入少量的micrococcal nuclease，benzonase等消化，有助于減少粘性，但是即使不處理一般不會影響后續實驗，用槍頭將沉淀搗碎。建議使用含有Thiourea ，Urea，NDSB-201或其它強溶解能力的去污試劑的緩沖液有利于沉淀的完全溶解。
注意事項：
1. 為提高石蠟包埋組織中蛋白質的回收效率，必須盡量減少在切片制作過程中甲醛固定時間，同時在石蠟包埋前徹底脫水，甲醛固定的時間越長，蛋白質的提取回收效率越低。
2. 盡量取用從石蠟包埋組織塊中切取的薄片，或沒有封閉到載玻片上的沒有經過蘇木精等染色的切片。
3. 材料越新鮮或甲醛固定時間越短，蛋白質的回收效率越高。
4. 提取試劑中含有含有刺激性的化合物，操作時要戴好乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服，防止吸入口鼻，沾染皮膚 眼睛后，立即用清水或生理鹽水沖洗，必要時尋求醫生的幫助。
5. 對于甲醛浸泡的組織樣本，每次可以取5-10mg的組織樣本，用雙蒸水洗滌離心收集后后，直接從步驟4開始操作。
6. 提取的蛋白沉淀如果用于ELISA、RIA等免疫實驗，可能需要行抗原修復程序，但是如果用Western Blot或Dot blot實驗，一般情況下沒有必要。
7. 本試劑盒只能夠用于體外實驗，不能夠用于臨床、治療和動物體內實驗等，由此產生的后果概不承擔責任。
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