SYA061 鼠傷寒沙門菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試
- 產(chǎn)品/服務(wù)：SYA061 鼠傷寒沙門菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試
- 型 號(hào)：SYA061
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價(jià)：面議
- 更新日期：2023-05-23
- 有效期至：長(zhǎng)期有效
- 瀏覽次數(shù)：1149
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
北京百奧萊博供應(yīng)的鼠傷寒沙門菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試用于科研試驗(yàn)，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價(jià)格，深為用戶稱道，了解更多鼠傷寒沙門菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試等細(xì)菌PCR檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品請(qǐng)聯(lián)系我司咨詢訂購(gòu)。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示：包括鼠傷寒沙門菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：鼠傷寒沙門菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：SYA061
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒
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名稱：阪崎腸桿菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：SYA001
規(guī)格：48次/盒
本試劑盒適合于增菌培養(yǎng)物、疑似病料及食品中阪崎腸桿菌(ESKZ)的檢測(cè)。阪崎腸桿菌(Enterobacter sakazakii)是乳制品中近幾年新發(fā)現(xiàn)的一種致病菌。它是存在自然環(huán)境中的一種“條件致病菌”，已被衛(wèi)生組織和許多確定為引起嬰幼兒死亡的重要條件致病菌，可導(dǎo)致任何年齡層人群的疾病，尤其是對(duì)早產(chǎn)兒、出生體重輕的嬰兒或免疫受損嬰兒的威脅zuì大，嚴(yán)重者可導(dǎo)致敗血癥、腦膜炎或壞死性小腸結(jié)腸炎。本方法為熒光PCR檢測(cè)方法，反應(yīng)在同一管內(nèi)連續(xù)進(jìn)行，操作簡(jiǎn)單，并有效防止了污染，能對(duì)樣品中或預(yù)培養(yǎng)液中的阪崎腸桿菌進(jìn)行快速檢測(cè)，具有特異性高、敏感性強(qiáng)和操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。
試劑盒組成：
| 組分 | 規(guī)格 |
| 熒光PCR反應(yīng)液(ESKZ-qPCR MIX) | 672μL |
| DNA抽提液(DNA Extraction ) | 2mL |
| 酶混合物(DNA Polymerase MIX) | 48μL |
| 陰性對(duì)照(NTC) | 50μL |
| 陽(yáng)性對(duì)照(ESKZ -PTC) | 50μL |
儲(chǔ)存條件：-18℃以下，有效期6個(gè)月。
使用方法：
一、樣品采集：
?食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)(GB/T 4789.40-2008)要求進(jìn)行。
?血液樣品：用無(wú)菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無(wú)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
?糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
?病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
注：上述樣品建議經(jīng)過增菌后，收集培養(yǎng)物用于檢測(cè)。
二、DNA提取：
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購(gòu)北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。
?液體培養(yǎng)物：取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無(wú)菌離心管中，8000rpm離心3min，盡量吸棄上清，加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
?固體培養(yǎng)物：挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
?糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
?其他液體標(biāo)本：取標(biāo)本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
注：陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無(wú)需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽(yáng)性對(duì)照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽(yáng)性對(duì)照。
三、檢測(cè)步驟：
1．試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(ESKZ -qPCR MIX)、酶混合物(DNA Polymerase MIX)，室溫融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
| 試劑 | 每個(gè)反應(yīng)加入的量 | N個(gè)反應(yīng)加入的量 |
| 熒光PCR反應(yīng)液 | 14 μL | N×14μL |
| 酶混合物 | 1 μL | N×1 μL |
| 總量 | 15 μL | N×15μL |
計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(ESKZ -PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
2．qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件：
| 1循環(huán) | 50℃ for 2 min | |
| 預(yù)變性 | 1循環(huán) | 95℃ for 10min |
| PCR擴(kuò)增 | 40循環(huán) |
95℃ for 15s 60℃ for 60s |
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM
四、結(jié)果分析：
1．結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測(cè)結(jié)果。基線和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
2．試驗(yàn)成立判定
?陰性對(duì)照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
?陽(yáng)性對(duì)照(ESKZ -PTC)：均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線，且Ct值≤35。
?以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則，此次試驗(yàn)視為無(wú)效。
3．結(jié)果判定
?在試驗(yàn)成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽(yáng)性，表明阪崎腸桿菌核酸陽(yáng)性。
?Ct值顯示為無(wú)的樣本為陰性樣本，表明阪崎腸桿菌核酸陰性。
?如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對(duì)于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，則為可疑陽(yáng)性，否則判為陰性。
?對(duì)于可疑陽(yáng)性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行阪崎腸桿菌real time PCR檢測(cè)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽(yáng)性，表明阪崎腸桿菌核酸陽(yáng)性；否則判為樣本陰性。
五、注意事項(xiàng)：
?初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
?所有使用的離心管應(yīng)高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
?PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
?樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行，以免污染。
?試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。
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