北京百奧萊博供應的銅鹽染色液(紅氨酸法)用于科研試驗，銅鹽染色液(紅氨酸法)是我司眾多優質細胞組織染色之一，質量堪比同類進口產品，價格非常優惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括銅鹽染色液(紅氨酸法)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：銅鹽染色液(紅氨酸法)
產品貨號：GL0912
產品規格：2×50ml

用途：
銅和同相關蛋白染色

注意事項：
固定劑采用中性福爾馬林，染色zuì好在恒溫水浴中進行。

儲存條件：室溫，避光，6個月

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名稱：內質網紅色熒光探針
貨號：YT175
規格：20μl
本探針是一種內質網紅色熒光探針，可以用于活細胞內質網特異性熒光染色。本探針為采用Molecular Probes公司的BODIPY TR進行了熒光標記的glibenclamide，分子量為915.23。

Glibenclamide即glyburide，中文名為格列苯脲，是一種2型糖尿病治療藥物，可以結合主要定位在內質網上的sulphonylurea受體。因此熒光標記的glibenclamide就可以用作內質網特異性的熒光探針。

本探針對于細胞的毒性低。而傳統的DiOC6(3)對ER染色的同時也對細胞有一定的毒性。本探針呈紅色熒光，檢測時的zuì大激發波長為587nm，zuì大發射波長為615nm。

本探針按照后附的使用說明染色后，用甲醛等固定后染色效果可以被部分保留。本品提供了探針稀釋液，使本探針的使用更加便捷。按照1:1000的比例稀釋，可以配制20ml探針工作液；按照1:3000的比例稀釋，可以配制60ml探針工作液。

注意事項：
1. 探針在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。對于微量的液體，每次使用前先離心數秒鐘，使液體充分沉降到管底。
2. 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

儲存條件：-20℃避光，有效期6個月。

名稱：溶酶體染色試劑盒(綠色熒光)-L02
貨號：HR8362
規格：125T|250T

名稱：細胞骨架染色試劑盒-C12
貨號：HR8578
規格：500T
細胞骨架(cytoskeleton)是真核細胞中由蛋白質聚合而成的三維的纖維狀網架體系。細胞骨架包括微絲、微管和中間纖維。細胞骨架在維持細胞形態，承受外力、保持細胞內部結構的有序性方面起重要作用。細胞骨架肌動蛋白是球形的、大約42kd的蛋白，在幾乎所有的真核細胞都存在。這是一個非常保守的蛋白，在各物種差異不超過20%。肌動蛋白是兩種細胞內絲狀結構的構成單體：微絲(三種主要的細胞骨架成分之一)，以及細肌絲(是肌肉細胞收縮復合物的一部分)。肌動蛋白參與很多重要的細胞功能，包括肌肉收縮，細胞移動，細胞分裂和胞質分裂、小泡和細胞器的運動、細胞信號，以及細胞連接和細胞形態的保持和建立。
顯示細胞骨架的常用方法有兩種：骨架蛋白染色法和免疫熒光染色法。骨架蛋白染色法具有簡單易行的特點，但不能區分骨架蛋白的組成，有些類型的纖維太細,在光學顯微鏡下無法分辨，常用于骨架形態及完整性研究；免疫熒光染色法可特異顯示骨架蛋白，是用一種微絲解聚抑制劑,它與肌動蛋白纖絲有強親和作用,使肌動蛋白纖絲穩定,抑制解聚,且只與F-actin 結合.因此,利用熒光標記可以清晰顯示細胞中微絲的形態,利用熒光顯微鏡對熒光標記的細胞骨架進行觀察,可以得到清晰的實驗結果.具有更普遍的應用意義。
本試劑盒采用絲狀肌動蛋白F-actin熒光染色法染色細胞骨架，可以用于各種植物、動物的細胞骨架染色。需要常規骨架蛋白染色試劑盒，可以選擇我公司貨號HR8337的產品。
本試劑盒采用熒光探針C12標記的鬼筆環肽標記骨架蛋白F-actin。
C12 為紅色熒光探針，我公司也為客戶提供綠色和藍色熒光的C11-Phalloidin和C13-Phalloidin標記試劑盒。可以滿足您完整的F-Actin微絲蛋白熒光染色方案，為您提供大的選擇空間和便利。
鬼筆環肽(Phalloidin)是一種來源于毒蕈類鬼筆鵝膏(Amanita phalloides)的環狀七肽毒素，以高親和力(Kd= 20 nM)選擇性結合于絲狀肌動蛋白F-actin，而不會與單體肌動蛋白G-actin 結合，通常用來標記組織切片，細胞培養物或無細胞體系中的F-actin，從而對F-actin 進行定性和定量分析。另外，鬼筆環肽衍生物也以相近的親和力結合于大小纖維，無論是動植物來源的肌肉細胞或非肌肉細胞，按照每一個肌動蛋白亞基約與一個鬼筆環肽分子的計量比結合。且非特異性結合幾乎可忽略，染色區域和非染色區域辨識度非常明顯。因此，鬼筆環肽衍生物特別適合替代肌動蛋白(Actin)抗體進行相關研究。另外鬼筆環肽衍生物很小，直徑約12-15?，分子量＜2000 Daltons，未標記肌動蛋白(Actin)的許多生理特性都得以維持，比如，同肌動蛋白結合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能發生反應；鬼筆環肽標記的纖維絲仍可穿透固相肌球蛋白基質；以及甘油抽提的肌纖維標記后仍可收縮等。鬼筆環肽(Phalloidin)的結合阻止絲狀肌動蛋白(微絲)的解離，穩定微絲結構，從而破壞微絲的聚合-去聚合的動態平衡。此特性使得肌動蛋白聚合發生的臨界濃度(CC)降至＜1μg/mL，因此，可用作一種聚合促進劑。此外，鬼筆環肽還可抑制F-actin的ATP 水解活性。
用熒光標記的鬼筆環肽染色可以清晰地顯示細胞中微絲的分布。將鬼筆環肽注射到細胞中同樣能阻止細胞運動，可見微絲的功能依賴于肌動蛋白的組裝和去組裝的動態平衡。鬼筆環肽這種性質使得它們成為一種探索F-Actin分布的的良好工具，可以通過用帶有各種熒光探針的鬼筆環肽結合Actin 絲狀物在熒光顯微鏡下觀察來實現。鬼筆環肽的熒光衍生物已經被證明在活體或固定細胞內定位Actin 絲狀物和在體外觀察actin 絲狀物的實驗中起重要作用。
C12-Phalloidin染色反應特異性強，對比性高，具有比Actin抗體更好的染色效果，適合用作F-actin的定性和定量檢測。另外，經本品結合后的F-actin 仍能維持actin自身具有的許多生物學特性。且本品的結合沒有物種差異性，適用性廣泛。
C12-Phalloidin可以廣泛用于固定、通透性細胞，但也可以進入活細胞中。

儲存條件：染料-20℃避光保存；稀釋液2-8℃保存。
有效期：六個月。

試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 固定液4%多聚甲醛 ● PBS ● 純水
● 透化液0.05-0.1% Triton X-100(溶于PBS)● 100 nM DAPI溶液
● 載玻片和蓋玻片● 蓋玻片周圍密封液(如透明指甲油)● 激光共聚焦顯微鏡

注意事項：
1．使用前請仔細閱讀說明書。
2．標本應新鮮，且未受其他化學物品污染。
3．應根據組織、細胞類型不同調整通透時間。
4．動物細胞樣本細胞通透劑處理的時間很關鍵，如果處理時間太短，會造成很深的背景顏色，干擾細胞骨架的觀察；如果處理時間太長，會破壞骨架蛋白使骨架纖維斷裂，造成細胞空洞。通透時間應控制在10-35分鐘。需要根據預實驗的染色結果確定zuì佳通透時間。一般預實驗起始通透時間植物樣本為10分鐘，動物細胞樣本5分鐘。
5．染色液染色時間根據根據預實驗結果可以進行調整，顏色過淺可延長染色時間，顏色過深可縮短染色時間。
6．洗片時動作要輕柔，避免將細胞從玻片上洗掉。
7．染色后用水充分洗滌，自然晾干即可，不能用常規的酒精梯度脫水方法。

使用方法：
不同樣本的操作方法稍有差異，請根據具體樣本操作。下面以細胞爬片/涂片樣本的染色為例，滴加相應的試劑到玻片上，加樣量以覆蓋樣本即可。如果是植物切片等，也可以在離心管、試管等里面進行洗滌、通透、染色等操作，zuì后置載玻片上觀察即可。

1．染色工作液配制：
將染料稀釋液(10×)用純水10倍稀釋成1×染料稀釋液備用。根據樣本數量，用1×染料稀釋液將C12-Phalloidin熒光染料100-200倍稀釋，配制成染色工作液。
【注】: 建議收到產品后，根據單次使用量，對母液進行小量分裝，-20℃避光凍存，一年穩定。
開始實驗前，使用1×PBS緩沖液稀釋儲存液到需要的工作濃度。工作濃度為根據不同細胞的預實驗結果確定的zuì佳工作濃度。工作液現配現用。
2．將制作好的細胞爬片/細胞涂片用37℃預熱的1×PBS(pH 7.4)清洗2次。
3．細胞固定：滴加溶于PBS的4%甲醛溶液進行細胞固定，室溫固定5分鐘，立即用PBS 洗滌3次。
【注】: 避免固定劑中含有甲醇成分，因為甲醇在固定過程中可能破壞肌動蛋白。
樣本多時可以用容器裝好PBS分別浸泡洗滌3次，樣本較少時也可以加500μl PBS 到玻片上進行洗滌。
此步驟為動物細胞樣本的步驟，植物切片類不需要做此步驟，第2 步洗滌完直接進行第4步通透即可。
4．室溫條件下，透化細胞：滴加0.05-0.1% Triton X-100/PBS溶液透化處理樣本，處理3-5分鐘。
【注】：經Triton 破膜過度后，C12-Phalloidin可能對細胞核有非特異性染色，注意通透時間。
該步驟可以省略，因為C12-Phalloidin分子量比較小，多聚甲醛固定后細胞膜產生的部分孔洞可以讓C12-Phalloidin 進入細胞。
5．室溫條件下，用PBS 洗細胞3次，自然晾干。
6．室溫條件下，染色：用適量細胞骨架染色液工作液，覆蓋住玻片上的細胞，室溫避光孵育40分鐘-更長時間，zuì長可以過夜染色，一般40分鐘-1小時即可。
【注】:可以在染色工作液內加入終濃度為1% BSA，能起到降低背景的作用；或者在染色前用含1% BSA的PBS 液室溫封閉細胞20-30分鐘。
孵育過程中為了避免溶液揮發，可將玻片轉移到一個密封的容器內。
7．用PBS 洗細胞3次，每次5分鐘。自然晾干。
8．使用適量濃度為100 nM的DAPI溶液對細胞核進行復染，約30秒即可。
9．用PBS洗細胞。
10．用激光共聚焦顯微鏡觀察。C12-Phalloidin激發/發射波長540-545/570-595nm和DAPI激發/發射波長359-364/454-461nm。
【注】:或封片后觀察。標本玻片可置于4℃避光保存，通常6個月內可繼續做染色分析。
結果：
細胞骨架纖維呈紅色。細胞核呈藍色。
細胞核和細胞質表面分布許多排列不規則的纖維束，走向清晰。
如果見到部分細胞骨架纖維并非呈纖維狀，而是呈串珠狀或顆粒狀，可以進一步優化通透、染色時間、染液濃度等條件。

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