副豬嗜血桿菌的品牌是百奧萊博，是優質的動物疫病PCR檢測試劑盒產品，本制品僅用于生物化學研究方面，我公司專注于動物疫病PCR檢測試劑盒產品的研發、生產和供應，為您提供的副豬嗜血桿菌質量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產品。...

特別提示：包括副豬嗜血桿菌(HPS)單重凝膠PCR檢測試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：副豬嗜血桿菌(HPS)單重凝膠PCR檢測試劑盒
產品貨號：SYA570
產品規格：48次/盒

一、簡介：
本試劑盒用一對副豬嗜血桿菌特異性引物，對副豬嗜血桿菌DNA進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

二、用途：
該試劑盒適合于發病豬呼吸道、血液樣本中副豬嗜血桿菌(HPS)的特異性檢測，用于副豬嗜血桿菌(HPS)的輔助診斷，其檢測結果僅供臨床參考。

三、試劑盒組成：(48T)

組份	數量	規格
副豬嗜血桿菌PCR反應液(HPS-PCR MIX)	1管	720μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
陰性對照(NTC)	1管	50μL/管
陽性對照(HPS-PTC)	1管	50μL/管

四、儲存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為6個月。

五、PCR儀器適用范圍
ABI系列，Roche系列等PCR檢測儀等。

六、樣品的采集與DNA提取
6.1 樣品的采集
6.1.1 血清：用一次性無菌注射器抽取靜脈血2mL，注入無菌的干燥玻璃管，室溫(22-25℃)放置30-60min，血標本可自發完成凝集析出血清，或直接使用水平離

心機，3000rpm離心5min，吸取上層血清，轉移至1.5mL滅菌離心管。
6.1.2 血漿：用一次性無菌注射器抽取靜脈血2mL，注入含EDTA2Na(乙二胺四乙酸二鈉)或檸檬酸鈉抗凝劑的玻璃管，立即輕輕顛倒玻璃管混合5-10次，使抗凝劑

與靜脈血充分混勻，5-10min后即可分離出血漿，轉移至1.5mL滅菌離心管。
6.1.3 糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
6.1.4 病灶部位樣品：取發病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
 注：上述樣品建議經過增菌后，收集培養物用于檢測。
6.2 DNA提取
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進行DNA核酸的粗提。也可采購北京百奧萊博科技有限公司生產的DNA提取試劑盒(過柱法-凝膠配套)，并按照相應

試劑盒說明進行操作。
6.2.1 培養物：取培養物50μL(培養至一定濁度)或者挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進行PCR

反應。
6.2.2 糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，

100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應。
6.2.3 其他液體標本：取標本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進

行PCR反應。
 注：陽性對照和陰性對照為已經抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區域加入陽性對照。

七、檢測步驟：
7.1 試劑的準備
從試劑盒中取出PCR反應液(HPS-PCR MIX)，室溫融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下：

試劑	每個反應加入的量	N個反應加入的量
PCR反應液	15μL	N ×15μL

向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL PCR反應液，向每管中加入處理后樣品/陰性對照(NTC)/陽性對照(HPS-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 PCR反應條件
將各反應管放入PCR儀器的反應槽內。推薦循環條件：

預變性	1循環	94℃ for 2 min
PCR擴增	35循環	94℃ for 30 sec 58℃ for 30 sec 72℃ for 30 sec

八、結果分析：
（1）稱取1.5g瓊脂糖放于250mL錐形瓶中，加入100mL 1×TAE電泳緩沖液，微波爐加熱溶解，稍冷后加入10μL染色液混勻，倒入插有梳子的制膠板中。
（2）待膠凝固后，取10μL Maker(推薦使用DL2000 Maker)點樣于左側凝膠孔中，取10μL PCR產物依次點樣于凝膠孔中，電壓值設定為電泳槽正負距離

(cm)與5(V/cm)的乘積。待溴酚蘭指示劑電泳至凝膠中部時停止電泳并使用凝膠成像儀或紫外透照臺觀察結果。


九、結果分析：
（1）陰性對照(NTC)：無任何的條帶(引物帶除外)。
（2）陽性對照(HPS-PTC)：在115bp處有條帶。
（3）被檢樣品：在115bp處有條帶為陽性樣品，否則為陰性樣品。
（4）以上條件應同時滿足，否則，此次試驗視為無效。

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名稱：禽流感病毒(AIV-M)通用型單重熒光PCR檢測試劑盒（定性/定量）
貨號：SYA320
規格：48次/盒|96次/盒
一、簡介：
禽流感病毒實時熒光qRT-PCR檢測試劑是按照美國農業部(USDA)的檢測標準和我國《禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法》(GB/T 19438.1-2004)而制備的商業化檢測試劑盒。本試劑盒為中的探針報告基團為6-FAM，淬滅基團為MGB。本方法可定性檢測所有亞型禽流感病毒。

二、用途：
本試劑盒適用于檢測各種禽類喉咽棉拭子、泄殖腔棉拭子、各種組織樣品、尿囊液及細胞培養液等。可用于禽流感病毒感染的輔助診斷、監測及流行病學調查，其檢測結果僅供參考。

三、試劑盒組成：(48T)
組份 數量 規格
熒光qRT-PCR反應液(AIV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
無核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
陰性對照(NTC) 1 管 50μL/管
陽性對照(AIV-PTC) 1 管 50μL/管

四、儲存條件及有效期：
本試劑盒于-18℃以下保存，有效期為6個月。

五、熒光PCR儀器適用范圍：
ABI系列，Roche系列等熒光定量PCR檢測儀等。

六、樣品的采集與RNA提取
6.1 樣品的采集
按照標準《高致病性禽流感診斷技術》(GB/T 18936-2003 )和《禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法》(GB/T 19438.1-2004 )進行樣品的采集。
6.2 樣品RNA提取
可按常規方法提取，也可采用商品化試劑盒提取病毒RNA。
（1） 取滅菌的1.5 mL Eppendorf離心管，做好標識。
（2） 每管加入600 μL裂解液，分別加入被檢樣本200 μL，再加入200 μL氯fǎng，混勻器上振蕩混勻5 s，于4℃ 12000 r 離心15 min。
（3） 取無RNA酶的1.5 mL Eppendorf離心管，加入-20℃預冷400μL異丙醇，吸取步驟(2)各管中的上清液轉移至相應的管中，避免吸出中間層，顛倒混勻。
（4） 于4℃ 12000 r離心15 min，棄上清，倒置于吸水紙上，沾干液體；加入600μL 75％預冷乙醇，洗滌。
（5） 于4℃ 12000 r離心10 min，棄上清，倒置于吸水紙上，沾干液體。
（6） 10000 r離心10 s，用微量加樣器將其吸干，室溫干燥5 min～10 min。
（7） 加入10μL 無核酸降解酶的水，溶解管底的RNA，5000 r離心5 s，冰上保存備用。若需長期保存須放置-70℃ 冰箱。
 注：陽性對照和陰性對照為已經抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區域加入陽性對照。

七、檢測步驟：
7.1 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光qRT-PCR反應液(AIV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000r離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(AIV-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 real time RT-PCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
反轉錄(Reverse Transcription) 1循環 45℃ for 5 min
預變性 1循環 94℃ for 30 sec
PCR擴增(PCR amplification ) 40循環 94℃ for 5 sec
60℃ for 30 sec
在60℃延伸時收集熒光信號 。報告基團：設置為FAM。

八、結果分析：
8.1 結果分析條件設定
直接讀取檢測結果。基線和閾值設定原則根據儀器噪聲情況進行調整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
8.2 試驗成立判定
（1） 陰性對照(NTC)：不應產生任何的擴增曲線。
（2） 陽性對照(AIV -PTC)：均產生擴增曲線。
（3） 以上條件應同時滿足 ，否則，此次試驗視為無效。
8.3 結果判定
（1） 在試驗成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明AIV核酸陽性。
（2） Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明AIV核酸陰性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數擴增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
（4） 對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進行AIV qRT-PCR檢測。如果重復擴增曲線為對數擴增曲線，判為樣本陽性，表明AIV核酸陽性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項：
（1） 初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
（2） 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含RNA酶。
（3） PCR操作應嚴格按照要求分區(試劑配制區、標本處理區、PCR擴增區等)，防止實驗室污染。
（4） 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區的超凈工作臺進行，以免污染。
（5） 試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照衛生部《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。


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