BTN131083 Ribo-SPIA cDNA擴(kuò)增
- 產(chǎn)品/服務(wù)：BTN131083 Ribo-SPIA cDNA擴(kuò)增
- 型 號：BTN131083
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-05-06
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：1083
產(chǎn)品簡介
北京百奧萊博供應(yīng)的Ribo-SPIA cDNA擴(kuò)增試劑盒用于科學(xué)研究，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多Ribo-SPIA cDNA擴(kuò)增試劑盒等核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示：包括Ribo-SPIA cDNA擴(kuò)增試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：Ribo-SPIA cDNA擴(kuò)增試劑盒
英文名稱：Ribo-SPIA RNA Amplification Kit
產(chǎn)品貨號：BTN131083
產(chǎn)品規(guī)格：20次
血液樣品和各種臨床樣品(包括組織檢查、FFPE切片或少量細(xì)胞樣品)都是基因表達(dá)分析和診斷的常見材料，但這些樣品通常數(shù)量有限，質(zhì)量不高，還沒法進(jìn)行第二次取樣。所以得到足夠RNA量供后續(xù)試驗是一個非常棘手的瓶頸。為解決這一問題，本公司根據(jù)Ribo-SPIA技術(shù)，開發(fā)了本產(chǎn)品。Ribo-SPIA技術(shù)的核心是利用DNA/RNA嵌合引物，以帶polyA尾巴的mRNA為模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄并得到雙鏈cDNA、RNase H不間斷地在cDNA第1鏈中的RNA部分產(chǎn)生裂口，DNA聚合酶以此裂口為基礎(chǔ)進(jìn)行鏈取代聚合反應(yīng)，產(chǎn)生cDNA單鏈。
產(chǎn)品特點：
1.，能線性擴(kuò)增1000-10000倍，能用5-100 ng總RNA模板擴(kuò)增得到5μg左右的單鏈cDNA(擴(kuò)增的cDNA主要來源于總RNA中的mRNA)。
2. 步驟簡單方便，擴(kuò)增在恒溫進(jìn)行，只需要4個小時，不需要特殊儀器設(shè)備。
3. 保真性好，保持RNA樣品中各分子的相對豐度。
4. 尤其適用于RNA產(chǎn)量和質(zhì)量都不高的樣品。
5.擴(kuò)增得到的單鏈cDNA能直接用于各種后續(xù)試驗，包括qPCR、芯片分析、雜交反應(yīng)等。
6. 本產(chǎn)品足夠做10次雙鏈cDNA的合成，20次SPIA擴(kuò)增。
試劑盒組成：
| 成分 | 規(guī)格 |
| cDNA一鏈合成緩沖液 | 40μl |
| MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶 | 10μl |
| cDNA二鏈合成緩沖液，5× | 160μl |
| cDNA二鏈合成酶混合液20× | 40μl |
| SPIA RT引物 | 40μl |
| SPIA反應(yīng)液，5× | 320μl |
| SPIA擴(kuò)增引物 | 320μl |
| SPIA酶混合液 | 120μl |
| 超純水 | 1ml |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期為1年。
使用方法：
一：樣品RNA的制備
本產(chǎn)品不含RNA相關(guān)試劑，用于Ribo-SPIA擴(kuò)增的每個批次的RNA樣品zuì好先做一個預(yù)實驗。總RNA樣品的濃度必須在1-20ng/μL，一次RIBO-SPIA所需總RNA的量為1ug。也可以使用mRNA，一次Ribo-SPIA所需總mRNA的量為5-100 ng。過低則需要濃縮，過高則需要用無RNase的水稀釋。RNA必須經(jīng)過DNase處理，不能含DNA污染。微量提取時不能使用核酸類的助沉劑。注意：本產(chǎn)品只能擴(kuò)增含帶polyA尾巴的RNA，不能擴(kuò)增DNA和不含polyA尾巴的RNA。
二：一管式雙鏈cDNA的合成
1.在0.5mL PCR管中，按下表配制雙鏈cDNA合成反應(yīng)。
注意：zuì好每次實驗設(shè)置一個陰性對照組，在此對照中用超純水替代自備的mRNA或總RNA:
| 成分 | 用量 |
| 自備mRNA或總RNA | 4μL mRNA(5-100ng)或4μL總RNA(1ug) |
| SPIA RT引物MTA3 20uM | 1μl |
| 65℃，5分鐘后室溫放置2分鐘，短暫離心后放4℃ | |
| cDNA一鏈合成緩沖液 | 4μl |
| MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶 | 1μl |
| 輕柔吹打混勻后得到10μL的反應(yīng)體系。42℃保溫90分鐘合成鏈cDNA。結(jié)束后70℃保溫15分使酶變性，zuì后4℃放置，然后加入下列成分，得到80μL反應(yīng)體系。 | |
| 超純水 | 50μl |
| cDNA二鏈合成緩沖液 | 16μl |
| cDNA二鏈合成酶混合液 | 4μl |
| 輕柔吹打混勻后，短暫離心，16℃保溫2小時合成cDNA第二鏈，然后75℃ 15分滅活酶，zuì后4℃放置待用 | |
三：SPIA擴(kuò)增
2.在0.5mL PCR管中，按下表配制20μL的SPIA反應(yīng)體系。注意：zuì好設(shè)置兩個陰性對照組，在此兩個對照中分別用超純水替代SPIA引物和cDNA雙鏈反應(yīng)液。
| 成分 | 用量 |
| cDNA雙鏈反應(yīng)產(chǎn)物 | 40μL(來于上步) |
| SPIA擴(kuò)增引物10uM | 16μl |
| SPIA反應(yīng)液，5× | 16μl |
| 超純水 | 42μl |
| 94℃20秒后50℃放置復(fù)性待用 | |
| SPIA酶混合液 | 6μl |
| 輕柔吹打混勻后得到120μL反應(yīng)體系，50℃擴(kuò)增60分鐘，zuì后4℃放置 | |
四：SPIA擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測
3. 取5μL SPIA擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行PAGE電泳檢測。標(biāo)準(zhǔn)的反應(yīng)結(jié)果是產(chǎn)生長度在200-2000bp之間的產(chǎn)物。
4. 如果產(chǎn)物將用于PCR定量，則可以不經(jīng)過純化直接使用，如果需要用于芯片雜交和濃度測定，則需要按常規(guī)的方法純化cDNA以便去除殘留的dNTP和引物。
5. OD檢測純度和濃度。在OD260的波長下測樣品你給的光吸收。由于擴(kuò)增產(chǎn)物是單鏈DNA，故1OD260=33ug/mL。
6. 所得DNA可以放-20℃長期放置。
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