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價格：電議
所在地：上海
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更新時間：2011-10-25
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公司地址：上海市七莘路1890弄7號
范貞祥(先生)
上海高創化學科技有限公司，是一家專注于生命科學和生物技術領域的高科技企業，是國內代理銷售生物試劑、儀器的知名公司之一。公司本著為顧客服務、為科研服務的宗旨，為中國的專家和學者提供種類齊全的高品質產品。希美公司已與多家歐美著名生物技術公司簽訂獨家或區域代理協議，銷售的實驗儀器、消耗品、分子生化試劑、免疫試劑和細胞培養試劑等，已被廣泛應用于生命科學基礎研究、開發應用、制藥、疾病診斷與控制、人口與健康、生物技術等諸多領域。客戶遍布大學、研究所、醫院、衛生防疫、商品檢驗檢疫、制藥公司、生物技術公司和食品工業等單位。主要產品包括：英國Randox-lifesciences公司的藥物殘留ELISA試劑盒、抗體抗體蛋白;挪威Biosese公司的檢測表面活性劑、農藥殘留、毒素、PCB等相關有害物質的ELISA檢測試劑盒以及魚類蛋白和抗體;Gibco公司DMEM培養基、1640培養基、F12培養基，MEM培養基、F10培養基等;Prospec-Tany公司的細胞因子、生長因子、蛋白激酶、重組和天然蛋白、酶以及病毒抗原和抗體;美國eBioscience公司的流式細胞術產品等。
高創的宗旨是：為用戶提供“最高質量的產品” 和 “最優質的服務”。
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人維生素D(VD)(Vitamin D)酶聯免疫吸附測定試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究研究使用
預期應用
ELISA法定量測定人血清、血漿或其它相關液體中Vitamin D含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心酶標免疫分析法測定標本中維生素D水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入維生素D抗原、生物素化的抗人維生素E抗體、HRP標記的親和素，經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的維生素D呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。
試劑盒組成
1. 酶聯板：一塊(96孔)
2. 標準品(凍干品)：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，其濃度為20 ug/mL，做系列倍比稀釋后，分別稀釋成20 ug/mL，10 ug/mL，5 ug/mL ，2.5 ug/mL，1.25 ug/mL，0.625 ug/mL，0.312 ug/mL，其原液直接作為zui高標準濃度，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 ug/mL，臨用前15分鐘內配制。
3. 樣品稀釋液：1×20ml/瓶。
4. 檢測稀釋液A：1×10ml/瓶。
5. 檢測稀釋液B：1×10ml/瓶。
6. 檢測溶液A：1×120ul/瓶(1：100)臨用前以檢測稀釋液A1：100稀釋。
7. 檢測溶液B：1×120ul/瓶(1：100)臨用前以檢測稀釋液B1：100稀釋。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
標本的采集及保存
1．血清：標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
2．血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
注：標本溶血會影響后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
操作步驟
各試劑在使用前平衡至室溫。
1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。除空白孔外，余孔分別加標準溶液或待測樣品100ul，輕輕混勻，37℃，120分鐘。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。
3. 每孔加檢測溶液A工作液 100ul，37℃,60分鐘。洗板3次，350ul/每孔，甩干。
4. 每孔加檢測溶液B工作液 100ul，37℃，60分鐘，洗板5次，甩干。
5. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光顯色30分鐘。
6. 依序每孔加終止溶液50ul，終止反應。用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
注：
1． 每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是后加底物溶液及2NH2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。
2．為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內。
洗板方法
手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層
吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內，浸泡1-2分鐘，根據需要，重復此過程數次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
特異性
本試劑盒可同時檢測重組或天然的人Vitamin D，且與其它相關蛋白無交叉反應。
計算
以標準物的濃度為橫坐標(對數坐標)，OD值為縱坐標(普通坐標)，在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1． 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
2． 一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
3． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。
4． 如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。
5．在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。
6．底物請避光保存。
檢測范圍：
0.2 ug/mL -30 ug/mL
說明
1. 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發和污染，試劑避免受到微生物的污染，因為蛋白水解酶的干擾將導致出現錯誤的結果。
2. 小心吸取試劑并嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預孵育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。而且，洗滌不充分將影響試驗結果。
3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃，具體以標簽上的標示為準。
4. 濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
5. 剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正常現象，不會對實驗結果造成任何影響。
6. 中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準。
7. 所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。
8. 有效期：6個月
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