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免疫組化實驗流程有哪些？
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詳細介紹
免疫組化實驗流程有哪些？
A. 免疫組化石蠟片操作過程：
1.取材固定：取新鮮組織，洗去血漬，剔除結締組織后 4%多聚甲醛（AR1068）
固定，時間視組織大小及厚度而定。
2. 切片及烤片：使用 APES（AR0001）或多聚賴氨酸（AR0003）處理的防脫玻片
（AR1065 或 AR1066）撈取切片。撈片后立即置烤箱 37 ℃5-6 小時以使切片
緊密粘附。
3. 組織切片常規脫蠟至水：依次 80%，90%，二甲苯及乙醇各 5-7 分鐘，
然后水洗。
4. 滅活：將切片置于 3%H2O2 （AR1108），室溫 5-10 分鐘以滅活內源性酶。蒸
餾水洗 3 次。
5． 熱修復抗原:將切片浸入 0.01M 枸櫞酸鹽緩沖液（AR0024，PH6.0）或 0.02M
PBS（AR0030，PH7.2-7.6）,電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電，間隔 5-10 分
鐘后，反復 1-2 次。自然冷卻至室溫。
酶修復抗原：消化酶（AR0022）處理組織，時間視消化酶濃度而定。
6. 滴加 5%BSA 封閉液（AR0004）, 37℃30 分鐘。甩去多余液體, 不洗。
7．滴加稀釋的一抗， 4℃過夜或 37℃2 小時。PBS（pH7.2-7.6）洗 5 分鐘×3 次。
8．滴加相應的二抗, 37℃ 30 分鐘。PBS（pH7.2-7.6）洗 5 分鐘×3 次。
9．滴加 SABC,37℃ 30 分鐘。PBS（pH7.2-7.6）洗 5 分鐘×4 次。
10．DAB 顯色:使用 DAB 顯色試劑盒(AR1022)。取 1ml 蒸餾水,加試劑盒中 A,B,C
試劑各 1 滴,混勻后加至切片。室溫顯色, 鏡下控制反應時間，一般在 15 分鐘
之間。蒸餾水洗滌。
11．蘇木素（AR0005）輕度復染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。
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