名稱 編號 R31918 50T Storage
試劑(A):VitaminB1標準(100μg/ml) 1ml 4℃避光
試劑(B):組織勻漿液(10×) 250ml RT
試劑(C):樣品校正液 100ml RT
試劑(D):沸石 100g RT
試劑(E):樣品洗脫液 500ml RT
試劑(F):VitaminB1氧化液 120ml RT
試劑(G):VitaminB1檢測液 30ml RT避光
試劑(H):硫酸鹽 100g RT
試劑(I):亞硫酸鹽 3×100mg RT
使用說明書 1份
保質期:：6個月有效；4℃運輸，4℃保存。
產品簡介:
維生素B1(VitaminB1)又稱硫胺素，屬于水溶性維生素，在有氧化劑存在時容易被氧化產生脫氫硫胺素，后者在有紫外光照射時呈現藍色熒光。
維生素B1檢測試劑盒(熒光光度法)是利用VitaminB1水溶液在堿性鹽溶液中能被氧化成藍色的硫色素(一種熒光化合物)，在紫外線下硫色素發出熒光，在激發波長365nm，發射波長435nm，在沒有其他熒光物質干擾時熒光強度與硫色素的濃度呈正比，可定量檢測維生素B1的含量，如果樣品中存在干擾物質，可用沸石吸附VitaminB1，以便去除待測樣品中干擾熒光測定的雜質。該試劑盒僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。
自備材料：
1、蒸餾水
2、pH計
3、離心管或試管
4、正丁醇
5、熒光光度計
操作步驟(僅供參考):
1、稀釋組織勻漿液：按組織勻漿液(10×):蒸餾水=1：9的比例稀釋，獲得1×組織勻漿液。
2、稀釋標準品：取適量的VitaminB1標準(100μg/ml)，按VitaminB2標準(100μg/ml)：蒸餾水=1：99稀釋成VitaminB1標準(1μg/ml)，4℃避光保存。
3、制備亞硫酸鹽工作液：取一支試劑(I)-亞硫酸鹽100mg粉末，充分溶解于0.5ml蒸餾水中配制成200mg/ml的亞硫酸鹽工作液，即配即用。
4、(選做)制備樣品：取待測材料如麥麩等，準確稱量2~5g，加入研磨器內，加入少量1×組織勻漿液，研磨碎，再次用1×組織勻漿液研磨，后一并倒入50ml離心管，補充1×組織勻漿液至25ml，充分混勻，沸水中孵育30min，冷卻至室溫，用樣品校正液調節pH至4.5，3500g離心10min，取上清加入2g沸石，振搖30min，棄液，蒸餾水清洗沸石2次，棄洗液，加入2.5ml樣品洗脫液攪拌沸石，洗脫2~3次，將洗脫液合并，并用樣品洗脫液定容至10ml，即為樣品凈化液。VitaminB1氧化：按下表操作，注意避光操作。
加入物(ml) 空白管 測定管 標準空白管 標準管
VitaminB1標準(1μg/ml) - - 2.5 2.5
樣品凈化液 2.5 2.5 - -
VitaminB1氧化液 1.5 0.9 1.5 0.9
VitaminB1檢測液 - 0.6 - 0.6
振搖15s
正丁醇 5 5 5 5
劇烈振搖90s，靜置分層，吸取下層溶液丟棄；上層溶液加入1.5g硫酸鹽混勻使脫水。
VitaminB1檢測：選用恰當的濾色片，測定的激發波長為365nm，發射波長為435nm，
提前預熱儀器30min，分別檢測測定管和標準管的熒光值，同時向空白管和標準空白管的
剩余液中加入0.05ml亞硫酸鹽工作液，立即混勻，在20~30s內測出各管的熒光值，作為
各自的空白值。
計算：
VitaminB1含量(mg/100g)=(A測定-A空白)×S×N×100/｛(A標準-A標準空白)×m×1000｝
式中：A測定=測定管的熒光值
A空白=空白管的熒光值
S=標準管中VitaminB1含量（μg）
N=稀釋倍數
A標準=標準管的熒光值
A標準空白=標準空白管的熒光值
m=樣品的質量(g)
注意事項：
1、在上述操作中，要嚴格避免VitaminB1受到陽光直射。
2、待測樣品如不能及時測定，應置于2~8℃保存，3天內穩定。
3、如果樣品濃度過高，應用蒸餾水稀釋后重測，結果乘以稀釋倍數。
