1，將要進行實驗的版孔進行設定好，標準品5個點，每個點設定平行，需要用到10個孔，空白只需1個孔。剩下孔可以做為樣本孔
2，稀釋標準，準備好5個EP管，然后在每個EP管中加入150微升標準稀釋液，編上編碼，分別為1，2，3，4,5，在1號管中加入150標準品，用槍頭反復吹打10次左右（注意控制幅度不要過大容易產生氣泡）如果有渦旋儀可以在渦旋儀上渦旋5秒左右，然后換槍頭，在1號管中取150微升加入到2號管，后面過程一次類推。等稀釋完，前面4個管中每管液體在150微升，5號管為300微升。濃度是從大到小。
3，標準、樣本、空白加樣：標準是每個濃度點2個孔（做平行），每孔加入50微升，加樣過程中注意換槍頭，樣本孔中每孔加入50微升，加樣過程中注意換槍頭，空白孔加入50微升蒸餾水。特別要說明的是，標準加樣和樣本加樣盡量控制在15分鐘內加完，如果時間拖的太長，會導致前面孔先反應后面孔才開始反應，這樣數值偏差過大。加完樣后蓋上封板膜，至37攝氏度孵育30分鐘.
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