產品儲存
1.感受態細胞必須用干冰運輸，融化后的感受態細胞不能再凍結儲存。如果用戶收到感受態細胞后發現泡沫箱中的干冰已經揮發殆盡，應予以拒收。
2.收到感受態細胞后應立即儲存在-70℃以下的冰箱中，在6個月內使用不影響轉化效率；感受態細胞不可反復凍融，不要與限制性內切酶等經常使用的分子生物學試劑放在一起，避免因溫度的波動而影響的效率。
JM109菌株介紹
基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi-1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac-proAB）/F’[traD36，proAB ，lacIq，lacZΔM15]。 特 點： 本菌株在使用pUC系列質粒載體進行DNA轉化或用M13 phage載體進行轉染時，由于載體DNA產生的LacZa多肽和JM09編碼的LacZΔM15進行α-互補，從而顯示β-半乳糖苷酶活性，由此很容易鑒別重組體菌株。
質量標準
1. 使用1 ng pUC19 Plasmid質粒DNA轉化100 ?l Competent Cells DH5α測試，產生的菌落數 ＞1×108 transformants/1?g pUC19 Plasmid 。
2. β-半乳糖苷酶、α-互補性的確認：對E.coli Competent Cells JM109使用pUC19 DNA進行轉化后，在含有100 ?g/ml的Ampicillin、40?g/ml的X-Gal的L-瓊脂平板培養基上，產生藍色菌落。
3. 100 ?l的E.coli Competent Cells JM109在含有 100 ?g/ml Ampicillin的L-瓊脂平板培養基上過夜培養40 hr不產生菌落。
用戶需自備的試劑與物品
1. 試劑：LB液體與固體培養基、抗生素。
2. 物品：彎頭玻棒鋪菌器、碎冰、水浴鍋、超凈工作臺、搖床、移液器與無菌槍頭、無菌1.5ml離心管、臺式小量離心機（可配1.5ml離心管和2ml離心管的轉子）。
3. 篩選藍白斑所需：X-gal、IPTG。
使用前準備
1. 感受態細胞從-80℃取出立即置于冰上凍融，將水浴鍋溫度設置為42℃或將相應抗生素平板溫育至37℃。
2. 相應抗生素溶液、24mg/ml的IPTG溶液及20mg/ml的X-gal溶液。注意20mg/ml的X-gal溶液要避光保存。
常規操作
1.從-70℃冰箱中取出感受態細胞置于冰上融化,如需分裝可將剛融化的細胞懸 液分裝到無菌預冷的離心管中,再置于冰浴中。
一次轉化感受態細胞的建議用量為 50-100 μl,可以根據實際情況分裝使用。應注意所用 DNA 體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一。以下實驗以100ul感受態細胞為例。
2.向感受態細胞懸液中加入目的DNA(1-10 ng,且體積<10 ?l),輕輕旋轉離 心管以混勻內容物,冰浴30分鐘。
轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源DNA量過多或體積過大時反而會降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態細胞體積的十分之一。
3. 將離心管置于42℃水浴中90秒，迅速將管轉移到冰上3分鐘。注意該過程不要搖動離心管。
4. 向離心管中加入900 μl 無菌LB 培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床振蕩培養1 小時（160-220 轉/分鐘）。 該步驟的目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
5. 將已轉化的感受態細胞低速離心（5000 rpm, 4分鐘）后棄掉部分上清，保留100-150μl培養基，用移液器輕輕吹打懸浮菌體后，全部加到含相應抗生素的LB 固體瓊脂培養基上，或含X-gal、IPTG及相應抗生素的LB瓊脂平板表面，用無菌彎頭玻棒鋪菌器將細胞均勻涂開。
如果預計的單克隆數量較多，可省略離心步驟，直接取200-300μl轉化產物涂布平板（過多的菌液涂布可能會使單克隆菌落粘連在一起，難以挑取）。涂布后剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少可以將剩下的菌液再涂布至新的平板上。
6. 將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養12-16 小時可出現單菌落或藍白斑。 簡易操作步驟 此步驟不適用某些抗生素抗性的質粒（比如卡那霉素抗性），若出現轉化異常，請用常規步驟操作。
簡易操作步驟
此步驟不適用某些抗生素抗性的質粒(比如卡那霉素抗性),若出現轉化異常,請用常規 步驟操作。
1. 將選擇性固體培養基放于培養箱中預熱至 37℃。
2. 從-70℃冰箱中取出感受態細胞置于冰上融化,如需分裝可將剛融化的細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中，在置于冰浴中。
3.向感受態細胞懸液中加入目的 DNA(1-10 ng,且體積<10 ?l),輕輕旋轉離 心管以混勻內容物,冰浴3-5分鐘。
轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源DNA量過多或體積過大時反而會降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態細胞體積的十分之一。
4. 取已轉化的感受態細胞直接涂布到預熱至37℃含相應抗生素的LB固體瓊脂培養基上，或含X-gal、IPTG及相應抗生素的LB瓊脂平板表面，用無菌彎頭玻棒鋪菌器將細胞均勻涂開。
5. 將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養12-16 小時可出現單菌落或藍白斑。
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