產品名稱:抗酒石酸酸性磷酸酶染色液
產品分類:酶類染色
規格:4×10ml/4×20ml
保存:-20℃避光,6個月
用途:細胞和組織的抗酒石酸酸性磷酸酶染色
注意事項:主要由萘酚、六氮化對品紅、亞硝酸鈉等組成,染色后酶活性部位呈紅色。
簡介:酸性磷酸酶(acidphosphatase,ACP)分布極廣泛,遍布各種組織,主要存在于細胞的溶酶體內,所以常作為溶酶體標志酶。溶酶體外的酸性磷酸酶存在于內質網和胞質內。各種動物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的適宜pH為4.5~5.5。存在于正常人肺泡巨噬細胞和白血病人脾臟的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resis acid phosphatase,TRAP)均在細胞濾泡中,并不是釋放入血液。血液中的TRAP絕大多數來源于破骨細胞,因此可以通過測量血液中的TRAP了解破骨細胞的功能狀態。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液以萘酚AS-BI為底物,在酸性pH下被酸性磷酸酶水解釋放出磷酸和萘酚,萘酚與重氮鹽偶聯生成有色產物,定位于細胞質中,若細胞內的ACP有抗酒石酸的活性,則呈陽性反應。該染色液可用于新鮮血涂片、細胞涂片,亦可用于冰凍切片、石蠟切片。
自備材料:
1、蒸餾水、恒溫箱
2、載玻片、推玻片
3、光學顯微鏡
操作步驟(僅供參考):
(一)血液、細胞涂片:
1、推片:取新鮮血液或骨髓涂片置于載坡片上,推玻片于載玻片保持30度,置于血液或細胞滴液的正前方,稍往后移不血液或細胞滴液接觸使后者沿推片下緣散開,再勻速沿載玻片平面平穩向前滑動至鋪滿血膜為止。
2、自然晾干,TRAP固定液4℃固定30s~3min,多數情況下30~60s即可。
3、水洗,稍微晾干(不易過分干燥)。
4、切片入TRAP孵育液,置于37℃溫箱,避光浸染45~60min,水洗。
5、復染:蘇木素染色液染色5min或甲基綠染色液染色2~3min。
6、水洗、晾干、鏡檢。
(二)冰凍切片:
1、冰凍切片回溫至37℃,水中浸泡1~2min。
2、自然晾干,TRAP固定液4℃固定1~3min。
3、水洗,稍微晾干(不易過分干燥)。
4、切片入TRAP孵育液,置于37℃溫箱,避光浸染45~60min,水洗。
5、復染:蘇木素染色液染色5~8min或甲基綠染色液染色2~3min。
6、水洗、晾干、鏡檢。
(三)石蠟切片:
1、石蠟切片脫蠟5~10min,重復一次。
2、無水乙醇5min,90%乙醇和70%乙醇各2min。
3、水洗2min。
4、自然晾干,TRAP固定液4℃固定30s~3min,多數情況下30~60s即可。
5、水洗,稍微晾干(不易過分干燥)。
6、切片入TRAP孵育液,置于37℃溫箱,浸染45~60min,水洗。
7、復染:蘇木素染色液染色5~8min或甲基綠染色液染色2~3min。
8、水洗、晾干、鏡檢。
染色結果:
陽性顆粒 紫紅色
細胞核 藍色(蘇木素)或綠色(甲基綠)
臨床意義:
1、毛細胞白血病的毛細胞ACP染色呈強陽性或中度陽性,且不被酒石酸抑制,其他細胞均呈陰性或極弱陽性。
2、急性白血病幼單核細胞ACP染色呈陽性,原淋巴細胞呈弱陽性,原粒細胞對ACP反應不一。
3、T淋巴細胞ACP染色呈陽性,顆粒粗大、分布密集。B淋巴細胞呈陰性或顆粒細小的弱陽性。
4、戈謝細胞呈強陽性,尼曼-皮克細胞呈陰性或弱陽性。






