ELISA方法的基本原理是：
(1)使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性
(2)使抗原假陽性抗體與某種酶聯結成酶標抗原或抗體，而且此酶標抗原或抗體即保 留活性又保留其酶活性 。
(3)測定時將受檢標本抗 原或抗體和酶標抗原或抗體按不 同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進行反應，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其它物質分開 ，后結合在 固相載體上 的酶量與標本 中受檢的抗體或抗原量成一定 的比例 ，再加入酶反應底物后 ，底物被酶催化后變為有色產物 。根據其顏色深淺進行定性或定量分析，以了解被測標本中抗原或抗體的含量。
ELISA方法被廣泛應用于各種抗原 或抗體 的測定 。影響ELISA中非特異性顯色的原 因很多，如試劑盒特異性、檢驗標本中含酶標記物的干擾物，操作過程中的問題等。
血清是常用的ELISA標本，標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致，分為內源性物質和外源性物質。
1 內源性物質 有人認為人血清標本中含有非特異性干擾
物質，可以不同程度影響檢測結果。常見 的干擾 物質有 ：類風濕因子 、補體、嗜異性抗 體、嗜靶抗原 自身抗體 、醫源性誘導的抗鼠(s)抗體、交叉反應物質和其它物質等。
1．1 類風濕因子 類風濕因子是可作用于多種動物以及人IgGFc段的自身抗體，多數為IgM類，能充當抗原成分與固相及酶標抗體反應，從而呈現非特異性顯色，從而導致假陽性。
1．2 補體 ELISA系統中固相一抗和標記二抗過程 中，抗體分子發生變構 ，基 Fc段 的補體 Clq分子結合位點被暴 露 出來，使 C1q可以將二者連接起來 ，從而造成假 陽性 。
1．3 嗜異性抗體 人類血清 中含含有能與 嚙類動物 (如 鼠等到)Ig(s)結合的天然嗜異性抗體，可將 ELISA系統中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性 。 ’
1．4 嗜靶抗原自身抗體、抗甲狀腺球蛋白、抗菌素胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時能與靶抗原結合形成復合物，在ELISA方法中可干擾抗原抗體測定結果。
1．5 醫源性誘導的抗鼠Ig(B)抗體 臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗菌素體治療，用放射性同位索標記鼠源性抗菌素體的影像診斷及靶向治療等新技術，均有可能使這些病人產生抗鼠的抗體；另外 ，被 鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內也可以產生抗鼠Ig(s)抗體，這些病人 ELISA測定時均可產生假性。
1．6 交叉反應物質類 地高辛、類 AFP樣物質等，是與靶抗原有交叉反應的物質。在用多抗測定抗原時對測定結果影響不大，但在用單克隆抗體測定抗原時，如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體對應的靶決定簇時，也會出現假陽性結果 。
1．7 標本中其它成分的影響 黃疸血標本中常含有內源性過氧化物酶，如用辣根過氧化物酶為標記物，就有可能產生非特異性顯色。血清脂質過高、、血紅蛋白及血液粘度過大等，均對 ELISA測定結果有干擾作 用。
2 外源性物質 外源性物質常常是由于用于 ELISA測定的血標本的采集 、貯存等不 當所致。如 標本溶血 、標本被細菌污染 、標本貯存過久、標本凝集不全和采血管中添加物等影響。
2．1 標本溶血 由于各種人為原因引起的標本溶血，均可因紅細胞破壞溶解 時釋放 出大量具有過氧化物酶活性 的血紅蛋白，在以辣根過氧化物為標記的 EusA測定中，會導致非特異性顯色，干擾測定結果。有報道酶免 HBsAg試劑檢測溶血標本時可造成假陽性 。
2．2 標本受細菌污染 如有細菌污染，菌體中可能含有內源性 HRP(辣根過氧化酶)【lJ。因此。被細菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可產生非特異性顯色而干擾測定結果。
2．3 標本保存不當 如在 冰箱中保存過久，其 中的 IgG可發生 聚合，在間接法 ELISA 中可使本底 加深llI。在冰箱 中保存不易過久。在冰箱 中保存過久的標本 ，血清中 IgG可 聚
合成 多聚體、AFP可形成二聚體，在間接法 ELISA測定中會導致本底甚至造成假陽性 ；標本放置時間過長(如一天以上)有時抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現假陽性，因此，血標本在采集處理時應小心 。
2．4 標本凝集不全 在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，正常血液采集后 1／2—2h開始凝固，18～24h完全凝固。臨床檢驗工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清 ，此時的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在 ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋 白塊 ，易造成假陽性結果。
2．5 標本管中添加物質的影響 抗凝劑(如肝索、EDTA)、酶抑制劑(如 NaN3可抑制 ELISA系統 中辣根過氧化物酶活性)及快速分離血清的分離膠均對 ELISA測定有一定的干擾用。
內源性物質及外源性物質造成的假陽性，解決的辦法如下 ：
內源性物質：類風濕因子造成假陽性時，解決的辦法是標本用聯有熱變性 (63℃ ，10arin)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性 IgG加入到標本稀釋液中同樣有效)；檢測抗原時，可以用 2一琉基乙醇等到加入到標本稀釋液中，使 RF降解；補體參于造成假 陽性時，可用用 EDTA稀釋標本或用 53℃，10arin或56％，30arin加熱血清使 Clq滅活；嗜異性抗體造成假陽性時，可在標本稀釋液中加入過量的動物 Ig(S)，但加入量不足或亞類不同時無效；嗜靶抗原 自身抗體造成假陽性時，測定前需用理化方法將其解離后再測定；醫源性誘導的抗鼠Ig(S)抗體造成假陽性時測定抗菌素原時，在標本中加入足量的正常鼠 Ig(s)從而克服由于上述原因造成的假陽性 。外源性物質：標本采集時必須注 意避免溶血 ；血清標本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5天內測定的血清標本可存放4℃，1周后測定的血清標本應低溫凍存；凍存后融解的標本蛋白質局部濃縮。分布不均，應充分混合后再測定，但混勻時應輕柔，不可強烈振蕩。標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標本采集時帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當的促凝劑。
綜上所述，對臨床檢驗對 ELISA測定中出現的假陽性或假陰性結果 ，除考慮試劑因素、操 作因素之外 ，更多的應從標本因素方面進行分析，并應采取相應措施排除干擾作用，從而為臨床提供可靠的檢驗結果。
