【產(chǎn)品名稱】
通用名：豬偽狂犬病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Porcine Pseudorabies Virus (ELISA)
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【預期用途】 偽狂犬病又名奧耶斯基氏病（Aujeszky's disease），是由偽狂犬病毒（Pseudorabies Virus，PRV）引起的家畜和多種野生動物的一種以發(fā)熱、奇癢、呼吸和神經(jīng)系統(tǒng)疾病為特征的急性傳染病。
本試劑用于檢測豬血清中豬偽狂犬病毒抗體，可用于豬偽狂犬病毒疫苗免疫效果評價。
【原 理】
本試劑盒由預包被豬偽狂犬病毒重組gD蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測豬血清、血漿樣本中豬偽狂犬病毒抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬偽狂犬病毒抗體，則將與酶標板上抗原結合，經(jīng)洗滌除去未結合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合；再經(jīng)洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，與酶標結合物反應形成藍色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關；加入終止液終止反應后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有豬偽狂犬病毒抗體。
【試劑盒組成】
|
序號 |
名稱 |
規(guī)格/96T×1 |
規(guī)格/96T×2 |
規(guī)格/96T×5 |
|
1 |
酶標記物 |
11ml×1(紅蓋) |
11ml×2(紅蓋) |
26ml×2(紅蓋) |
|
2 |
樣品稀釋液 |
50ml×1(黃蓋) |
50ml×1(黃蓋) |
200ml×1(黃蓋) |
|
3 |
20X濃縮洗滌液 |
40ml×1(白蓋) |
40ml×1(白蓋) |
200ml×1(白蓋) |
|
4 |
底物液A |
6ml×1(白蓋) |
11ml×1(白蓋) |
26ml×1(白蓋) |
|
5 |
底物液B |
6ml×1(黑蓋) |
11ml×1(棕蓋) |
26ml×1(黑蓋) |
|
6 |
終止液 |
6ml×1(黃蓋) |
11ml×1(黃蓋) |
26ml×1(黃蓋) |
|
7 |
陽性對照 |
1.0 ml×1(紅蓋) |
1.5 ml×1(紅蓋) |
2.0 ml×1(紅蓋) |
|
8 |
陰性對照 |
1.0 ml×1(綠蓋) |
1.5 ml×1(綠蓋) |
2.0 ml×1(綠蓋) |
|
9 |
酶標板 |
96T×1 |
96T×2 |
96T×5 |
|
10 |
蓋板膜 |
1 |
2 |
5 |
|
11 |
自封袋 |
1 |
1 |
2 |
|
12 |
說明書 |
1 |
1 |
1 |
|
13 |
稀釋板 |
1 |
2 |
5 |
【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調(diào)微量移液器。
【樣品準備】
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條，設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加350 ul工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，zui后一次拍干。
6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）。蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應10分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值），無參比波長用空白孔調(diào)零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。
【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照≤0.10，陽性對照≥0.6。
【檢驗結果的解釋】
1.樣品A值≥0.38為陽性；樣品A值在0.2到0.38之間為可疑；樣品A值＜0.2為陰性。
2.本實驗結果為陰性或可疑時表明豬只抗體水平不足，建議補打相應疫苗。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測豬血清、血漿中豬偽狂犬病毒抗體，根據(jù)A值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以完全溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮。
7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。
