大鼠蛋白激酶ELISA試劑盒處理和保存原則有以下幾點:
1、要注意避免出現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標記酶的ELISA測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應顯色。
2、樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,一則細菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產生分解作用;二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產生非特異性干擾。
3、冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用,從而引起假陰性結果。此外,凍融標本的混勻亦應注意,不要進行劇烈振蕩,反復顛倒混勻即可。
4、血清標本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應在-70℃以下。標本在保存中如出現細菌污染所致的混濁或絮狀物時,應離心沉淀后取上清檢測。
檢測程序:
1。準備好所有試劑,工作標準和樣品在前面的章節中。
2。請確定井數的使用,并把任何剩余的井和入袋干燥劑,密封保鮮袋,將未使用的井在4°C的含量布局表
3。每孔加入100μl的標準和樣品。封面用膠粘帶提供。孵育2小時,在37℃下一盤布局記錄標準和樣品檢測。
4。每孔中取出的液體,不洗。
5。向每孔中加入100μl生物素抗體(1倍)。蓋上一個新的膠粘帶。為1小時孵育在37℃下(生物素抗體(1X)可能會出現混濁。預熱至室溫,輕輕混勻,直到出現均勻解決方案。)
6。吸液的各孔和洗滌,共洗滌三次重復該過程兩次。洗凈,每孔填充洗滌緩沖液(200μL)使用噴瓶,多道移液器,歧管器,或autowasher,和,靜置2分鐘,徹底清除液體的每一步是必不可少的良好的性能。后一次洗滌后,清除任何剩余洗滌緩沖液的吸ordecanting。倒置板和涂抹對干凈的紙巾。
7。向每孔中加入100μl的HRP-抗生物素蛋白(1×)。量的微量滴定板,用一個新的粘接劑條。溫育1小時,在37℃下
8。重復的愿望/洗滌過??程中,在步驟6的5倍。
9。將90μlTMB底物添加到每個孔中。孵育15-30分鐘,在37℃下避光
10。一站式解決方案,每孔加入底物,輕輕晃動酶標板,以確保充分混合。
11。在5分鐘內,設置至450nm,使用酶標儀測定各孔的光密度。如果波長校正,設置為540nm或570nm處。在540nm或570nm波長在450nm處的讀數減去讀數。該減法校正板的光學缺陷。在450nm處未經修正讀數直接,可能會比較高,不太準確。 上一篇 美國科學家設計出人工蛋白 下一篇 關于ELISA KIT回收率的問題分析
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