人ELISA試劑盒實驗封閉很重要
封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結(jié)合的機會。您當然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過高，懷疑封閉不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當延長封閉時間。
如果您一直被背景問題所困擾，那么也許您該花些時間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時間，但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結(jié)合，但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。
常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液、穩(wěn)定，在去除洗滌過程中的一些非特異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時起作用，因為很容易被洗掉。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度（正常濃度為0.01-0.1%），它會降低特異結(jié)合，產(chǎn)生假陰性。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液，后者可協(xié)助洗滌過程中的封閉。
其基本程序為：
① 抗體包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干
② 加入待檢抗原及一定量的酶標抗原（對照孔僅加酶標抗原）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干
③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液
④ 用ELISA試劑盒檢測儀測定OD值。
被結(jié)合的酶標抗原的量由酶催化底物反應產(chǎn)生有色產(chǎn)物的量來確定，如果待檢溶液中抗原越多，被結(jié)合的標記抗原的量就越少，有色產(chǎn)物就減少，這樣根據(jù)有色產(chǎn)物的變化就可求出未知抗原的量。此法的優(yōu)點在于快速、特異性高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測；其主要不足在于每種抗原都要進行酶標記，而且因為抗原的結(jié)構(gòu)不同，還需應用不同的結(jié)合方法。此外試驗中應用酶標抗原的量較多。
小鼠CD40配體(CD40L)ELISA試劑盒 ，英文名： CD40L ELISA Kit
小鼠CD3d分子(CD3d)ELISA試劑盒 ，英文名： CD3d ELISA Kit
小鼠CD320分子(CD320)ELISA試劑盒 ，英文名： CD320 ELISA Kit
小鼠CD30配體(CD30L)ELISA試劑盒 ，英文名： CD30L ELISA Kit
小鼠CD163分子(CD163)ELISA試劑盒 ，英文名： CD163 ELISA Kit
小鼠CD14分子(CD14)ELISA試劑盒 ，英文名： CD14 ELISA Kit
小鼠CCAAT增強子結(jié)合蛋白β(CEBPβ)ELISA試劑盒 ，英文名： CEBPβ ELISA Kit
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小鼠B-細胞淋巴瘤因子2(Bcl2)ELISA試劑盒 ，英文名： Bcl2 ELISA Kit
小鼠B-細胞激活因子受體(BAFFR)ELISA試劑盒 ，英文名： BAFFR ELISA Kit
小鼠B-細胞激活因子(BAFF)ELISA試劑盒 ，英文名： BAFF ELISA Kit
小鼠B-細胞κ-輕肽基因增強子抑制因子激酶β(IκBKβ)ELISA試劑盒 ，英文名： IκBKβ ELISA Kit
小鼠B-淋巴細胞趨化因子1(BLC1)ELISA試劑盒 ，英文名： BLC1 ELISA Kit
小鼠B-淋巴細胞激活抗原B7-2(LAB7-2)ELISA試劑盒 ，英文名： LAB7-2 ELISA Kit
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小鼠A類清道夫受體3(SCARA3)ELISA試劑盒 ，英文名： SCARA3 ELISA Kit
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小鼠AMPA離子能谷氨酸受體2(GRIA2)ELISA試劑盒 ，英文名： GRIA2 ELISA Kit
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小鼠Ⅹ型膠原(COL10)ELISA試劑盒 ，英文名： COL10 ELISA Kit
小鼠ⅩⅤ型膠原(COL15)ELISA試劑盒 ，英文名： COL15 ELISA Kit
小鼠Ⅶ型膠原(COL7)ELISA試劑盒 ，英文名： COL7 ELISA Kit
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