上海高創(chuàng)化學(xué)科技有限公司，是一家專注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的高科技企業(yè)，是國內(nèi)代理銷售生物試劑、儀器的知名公司之一。公司本著為顧客服務(wù)、為科研服務(wù)的宗旨，為中國的專家和學(xué)者提供種類齊全的高品質(zhì)產(chǎn)品。希美公司已與多家歐美著名生物技術(shù)公司簽訂獨家或區(qū)域代理協(xié)議，銷售的實驗儀器、消耗品、分子生化試劑、免疫試劑和細(xì)胞培養(yǎng)試劑等，已被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)基礎(chǔ)研究、開發(fā)應(yīng)用、制藥、疾病診斷與控制、人口與健康、生物技術(shù)等諸多領(lǐng)域。客戶遍布大學(xué)、研究所、醫(yī)院、衛(wèi)生防疫、商品檢驗檢疫、制藥公司、生物技術(shù)公司和食品工業(yè)等單位。主要產(chǎn)品包括：英國Randox-lifesciences公司的藥物殘留ELISA試劑盒、抗體抗體蛋白;挪威Biosese公司的檢測表面活性劑、農(nóng)藥殘留、毒素、PCB等相關(guān)有害物質(zhì)的ELISA檢測試劑盒以及魚類蛋白和抗體;Gibco公司DMEM培養(yǎng)基、1640培養(yǎng)基、F12培養(yǎng)基，MEM培養(yǎng)基、F10培養(yǎng)基等;Prospec-Tany公司的細(xì)胞因子、生長因子、蛋白激酶、重組和天然蛋白、酶以及病毒抗原和抗體;美國eBioscience公司的流式細(xì)胞術(shù)產(chǎn)品等。

　　高創(chuàng)的宗旨是：為用戶提供“最高質(zhì)量的產(chǎn)品” 和 “最優(yōu)質(zhì)的服務(wù)”。

人髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA Kit Human myelin basic protein,MBP ELISA Kit
人碳酸酐酶(CA)ELISA Kit Human carbonic anhydrase,CA ELISA Kit
人橫紋肌輔肌動蛋白α (sm Actinin-α )ELISA Kit Human skeletal muscle Actinin-α,sm Actinin-α ELISA Kit
人骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA Kit Human Bone morphogenetic protein 7,BMP-7 ELISA Kit
人載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA Kit Human apoprotein A1,apo-A1 ELISA Kit
人載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA Kit Human apoprotein B100,apo-B100 ELISA Kit
人25羥基維生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA Kit Human 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3 ELISA Kit
人維生素C(VC)ELISA kit Human Vitamin C,VC ELISA Kit
人維生素B6(VB6)ELISA Kit Human Vitamin B6,VB6 ELISA Kit
人白三烯B4(LTB4) ELISA Kit Human Leukotriene B4,LT-B4 ELISA Kit
人腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA Kit Human intestinal fatty acid binding protein,iFABP ELISA Kit
人氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA Kit Human oxidized lowdensity lipoprotein,OxLDL ELISA Kit
人維生素D(VD)ELISA Kit Human Vitamin D,VD ELISA Kit
 

人維生素D(VD)(Vitamin D)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究研究使用
 
預(yù)期應(yīng)用
ELISA法定量測定人血清、血漿或其它相關(guān)液體中Vitamin D含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測定標(biāo)本中維生素D水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入維生素D抗原、生物素化的抗人維生素E抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的維生素D呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。
試劑盒組成
1. 酶聯(lián)板：一塊(96孔)
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，其濃度為20 ug/mL，做系列倍比稀釋后，分別稀釋成20 ug/mL，10 ug/mL，5 ug/mL ，2.5 ug/mL，1.25 ug/mL，0.625 ug/mL，0.312 ug/mL，其原液直接作為zui高標(biāo)準(zhǔn)濃度，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 ug/mL，臨用前15分鐘內(nèi)配制。
3. 樣品稀釋液：1×20ml/瓶。
4. 檢測稀釋液A：1×10ml/瓶。
5. 檢測稀釋液B：1×10ml/瓶。
6. 檢測溶液A：1×120ul/瓶(1：100)臨用前以檢測稀釋液A1：100稀釋。
7. 檢測溶液B：1×120ul/瓶(1：100)臨用前以檢測稀釋液B1：100稀釋。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

標(biāo)本的采集及保存
1．血清：標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2．血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：標(biāo)本溶血會影響后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。

操作步驟
各試劑在使用前平衡至室溫。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。除空白孔外，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測樣品100ul，輕輕混勻，37℃，120分鐘。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。
3. 每孔加檢測溶液A工作液 100ul，37℃,60分鐘。洗板3次，350ul/每孔，甩干。
4. 每孔加檢測溶液B工作液 100ul，37℃，60分鐘，洗板5次，甩干。
5. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光顯色30分鐘。
6. 依序每孔加終止溶液50ul，終止反應(yīng)。用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
注：
1． 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是后加底物溶液及2NH2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。
2．為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)。
洗板方法
手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層
吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
    自動洗板：如果有自動洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
特異性
    本試劑盒可同時檢測重組或天然的人Vitamin D，且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。
計算
  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)(對數(shù)坐標(biāo))，OD值為縱坐標(biāo)(普通坐標(biāo))，在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1． 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
2． 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
3． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。
4． 如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。
5．在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液工作液時，請以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。
6．底物請避光保存。
檢測范圍：
0.2 ug/mL -30 ug/mL
說明
1. 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染，因為蛋白水解酶的干擾將導(dǎo)致出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。
2. 小心吸取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。而且，洗滌不充分將影響試驗結(jié)果。
3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃，具體以標(biāo)簽上的標(biāo)示為準(zhǔn)。
4. 濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
5. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。
6. 中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準(zhǔn)。
7. 所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
8. 有效期：6個月