- 產品目錄
- 品牌分類
聯系人：李
電話：400-821-8510
手機：15000266580
郵件：xiangfbio@163.com
聯系時,請告知信息來自給覽網
什么時候需要穩(wěn)定細胞株？
發(fā)布時間：2019-02-15瀏覽次數：1556返回列表
細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經次傳代成功后即為細胞系(cell line)， 由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代，或傳代次數有限， 可稱為有限細胞系(finite cell line)， 如可以連續(xù)培養(yǎng)， 則稱為連續(xù)細胞系(continuous cell line)， 培養(yǎng)50代以上并培養(yǎng)下去。 所以細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的具有特殊性質或標志的培養(yǎng)細胞。從培養(yǎng)代數來講，可培養(yǎng)到40-50代。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。對于人類腫瘤細胞，在體外培養(yǎng)半年以上，生長穩(wěn)定，并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。什么時候需要穩(wěn)定細胞株？
以下實驗，構建穩(wěn)定細胞株而不是瞬時轉染更能滿足實驗要求：
1、外源片段在分裂細胞中長期(>2周)穩(wěn)定表達。雖然普通轉染實驗一般只能保證2-4天的轉染和表達效率，但腺病毒載體在多數分裂細胞中可以維持2-4周內的高轉染效率和表達周期。而非分裂細胞，可以使用腺相關病毒載體轉導外源基因，因為腺相關病毒載體在許多非分裂細胞中可以保持長達1年的表達。
2、需要構建使用誘導表達系統，這主要是由于：
a、過表達基因或者干擾目的基因引起細胞毒性或者抑制細胞生長等不利因素;
b、目的基因的過表達或者干擾需要時空特異性。
3、希望控制目的基因過表達或者干擾的拷貝數，以避免引入人為因素影響實驗結果的性。構建穩(wěn)定株可以幫助篩選拷貝數適量的細胞進行實驗研究。
4、部分細胞種類，病毒載體亦無法達到高轉導效率，通過構建穩(wěn)定株，達到外源片段的表達。
5、長期在少數幾類細胞中研究幾個基因的功能，通過構建穩(wěn)定株，可以大大降低頻繁轉染或者病毒包裝的成本，也大方便實驗研究。
6、部分蛋白穩(wěn)定性強，瞬時RNA干擾因為作用周期短，只能抑制目的基因的表達，但無法去除已經表達的目的蛋白，所以需要通過構建穩(wěn)定株實現更好的基因干擾效果。
7、需要往動物體內注射表達有外源片段的細胞。需要構建穩(wěn)定細胞株，以防止注射入動物體內后，很快外源片段表達丟失。
8、細胞個體差異(同一類細胞，不同個體細胞基因組存在差異)對實驗結果有干擾，需要構建單克隆細胞株去除干擾。
9、需要將外源片段插入基因組中，比如基因敲除，基因插入突變篩選等修飾基因組的實驗。
